산성 탈인산가수분해효소의 활동도측정 및 정량

소개

"산성 탈인산가수분해효소의 활동도측정 및 정량"에 대한 내용입니다.

목차

1. 실험 목적
2. 실험원리 및 이론
3. 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 유의사항
6. 실험결과
7. 고찰
8. 참고문헌

본문내용

1. 실험 목적
이 실험은 세포 또는 조직(맥아)으로부터 추출한 효소(산성 탈인산가수분해효소)를 정제하여 효소 활성도를 측정하고 정량분석하는 실험으로 효소의 기능, 분리, 정제 과정을 학습하고 이해할 수 있다.

2. 실험원리 및 이론
<효소의 기능>
산성 탈인산가수분해효소는 주로 리소좀에서 작용하며, 다양한 생리적 과정에서 중요한 역할을 한다. 이 효소는 특정 기질(예: p-니트로페닐 인산염, PNPP)로부터 인산기를 떼어내는 가수분해 반응을 촉매한다. 이 실험의 기질인 PNPP는 가수분해되면 노란색 화합물인 p-니트로페놀을 생성하며, 이 변화를 통해 효소의 활성을 측정할 수 있다.
산성 탈인산가수분해효소는 pH 5.0 이하의 산성 조건에서 가장 잘 작용한다.

<중 략>

<투석(Dialysis)>
투석은 단백질 정제 방법 중 하나로 확산을 이용한 방식이다.
반투과성막을 이용해 분자 크기에 따라 물질을 분리하는 원리로 작동하며, 정제하고자 하는 단백질을 손상시키지 않으면서 작은 불순물을 효과적으로 제거할 수 있다.
단백질 용액을 반투과성 막 안에 넣고 이 막을 통해 염, 불순물 등의 크기가 작은 분자들이 막 외부의 용매로 확산되어 빠져나갈 수 있게 한다. 따라서 단백질과 같은 큰 분자는 막 안에 남게 된다.

<효소 활성 측정 및 정량 분석>
PNPP를 이용한 효소 활성 측정: 산성 탈인산가수분해효소는 pNPP와 같은 특정 기질을 가수분해하여 p-니트로페놀(pNP)을 생성한다. 이 반응의 산물은 알칼리성 환경에서 노란색을 띠며, 가시광선 분광광도계로 측정하여 효소의 활성을 정량적으로 분석할 수 있다.

참고자료

· ooper, T. G., 1977, The tools of Biochemistry, Wiley, New York. - Joyce, B. K., Grisolia, S., 1960, “Puri,ication and Properties of a Nonspecific Acid Phosphate
· from Wheat Germ”, J. Biol. Chem., 235. 2278 - Stenesh, J., 1984, Experimental Biochemistry, Allyn and Bacon, Inc., Boston - Nelson, D. L., & Cox, M. M. (2020). Lehninger Principles of Biochemistry (8th ed., 번역판).
· 서울: 범문에듀케이션. -Sigma-Aldrich. (2020). Potassium hydroxide (KOH) Material Safety Data Sheet. Retrieved
· from https://www.sigmaaldrich.com - Thermo Fisher Scientific. (2020). p-Nitrophenyl Phosphate (PNPP) Material Safety Data
· Sheet. Retrieved from https://www.thermofisher.com - David L. Nelson/Michael M. Cox/ 대표역자 윤경식, 2023, 레닌저 생화학, 월드사이언스,p
· 83-89/p 178 - 생명과학을 위한 생화학, 김나현 외7인, 지구문화사, 2011, p130