생화학 실험/실습 보고서 (DNA Gel electrophoresis)

소개

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목차

[1] 실험 목적
[2] 이론
[3] 실험 시약 및 기구
[4] 실험 방법
[5] 실험 결과
[6] 참고문헌

본문내용

[1] 실험 목적
제한효소의 원리에 대해 이해하고, 전기영동을 통해 실험 결과를 확인한다.

[4] 실험 방법
<DNA sample 만들기 - 제한효소(Bam HI)을 이용한 절단>
1. e-tube에 DDW 6.5μL를 먼저 넣고 DNA 1.5μl를 넣고 B buffer와 BamHI를 각각 1μL씩 넣고 잘 섞어주고 mini centrifuge에 잠시 돌려주었다.
2. sample을 37°C 오븐에서 1시간 동안 incubation 했다. (기다리는 동안 gel을 만들었다.)
3. incubation 후 sample A에 gel loading dye 2μL를 넣었다.

<Gel 만들기>
1. agarose 1.2g을 삼각플라스크에 넣고 120ml의 1X TAE buffer를 가했다. (1.0% gel)
*일반 buffer를 넣으면 DNA를 넣어도 loading이 되지 않는다. 반드시 TAE buffer를 사용한다.
2. 삼각플라스크의 입구를 랩으로 싸고 구멍을 뚫은 후 약 2분간 전자레인지로 녹였다.
*갑자기 부글부글 올라올 수도 있으므로 지켜봐야 한다. 꺼내서 좀 흔들어보고 다시 녹인다.
3. 용액이 충분히 식었으면 용액에 midori green dye 4.8μL 넣고 잘 섞었다.
4. 수평을 맞춘 tray에 붓고 comb를 꽂아서 굳혔다. (30분 정도)
5. Gel이 굳으면 comb을 뺐다.

<DNA sample loading>
1. Gel을 running chamber에 넣고 1X TAE buffer를 gel이 잠길 만큼 부었다.
2. DNA marker 4μL와 sample을 well에 넘치지 않도록 loading 했다.
3. 뚜껑을 덮고 전기영동을 시작했다.
4. 처음에는 90V에서 시작하고 10분 뒤 DNA가 gel에 들어간 후에는 50V로 낮추었다.
*90V로 하고 나면 gel 깊숙이 DNA가 내려간 느낌
5. Gel의 1/2~2/3 지점까지 내려가면 멈추었다. (40분 정도)

<DNA 확인하기>
1. 전기영동이 끝난 gel을 UV transilluminator로 관찰했다.

참고자료

· 네이버 지식백과 분자ㆍ세포생물학백과, 제한효소
· 네이버 지식백과 영양학사전, agarose
· 네이버 지식백과 분자ㆍ세포생물학백과, DNA
· 네이버 지식백과 분자ㆍ세포생물학백과, Amestest