생화학 실험/실습 보고서 (형광 현미경을 통한 세포의 관찰)

소개

"생화학 실험/실습 보고서 (형광 현미경을 통한 세포의 관찰)"에 대한 내용입니다.

목차

[1] 실험 목적
[2] 이론
[3] 실험 시약 및 기구
[4] 실험 방법
[5] 실험 결과
[6] 참고문헌

본문내용

[1] 실험 목적
세포를 현미경으로 관찰하기 위해 사용되는 염색의 원리를 알아보고 직접 관찰한다.

[4] 실험 방법
1. 조교에게 세포가 배양되어있는 cover glass를 받아갔다.
2. PBS 1mL로 워싱했다. (워싱 후 PBS는 제거했다.)
*PBS를 넣을 때는 glass에 직접 닿으면 cell이 떨어질 수 있으므로 벽면에 대고 살살 넣어준다.
3. 4% paraformaldehyde (in PBS) 1mL 넣고 10분 동안 상온에 두었다.
4. IcecoldPBS1mL로 두 번 워싱하고 icecoldPBs1mL를 새로 넣은 뒤 10분 동안 상온에 두었다.
5. 0.25% Triton X-100 포함한 PBS를 1mL씩 넣고 3분 동안 상온에 두었다.
6. IcecoldPBS1mL로 두 번 워싱하고 icecoldPBS1mL를 새로 넣은 뒤 10분 동안 상온에 두었다.
7. 10mLPBS+DAPI0.3μL가 혼합된 용액을 1ml 넣은 뒤 호일로 감싼 후 5분간 상온에 두었다.
8. Ice cold PBS 1mL로 두 번 워싱했다.
9. Ice cold PBS 3mL를 넣고 호일로 감싼 후 7층 실습실로 이동했다.
10. 킴테크를 70% EtOH로 적셔서 핀셋과 슬라이드 글라스를 소독했다.
11. 소독한 핀셋으로 cover glass를 꺼내 소독된 슬라이드 글라스에 밀착시켰다.
*Cover glass의 윗면이 공기가 들어가지 않도록 slide glass와 맞닿게 밀착한다.
*현미경 관찰 시 cover glass가 아래쪽으로 오도록 둔다.
12. 형광 현미경으로 관찰했다. (10X, 20X, 40X 순서)

<주의사항>
- 모든 과정에서 cell이 붙어 있는 cover glass에는 최대한 직접적으로 용액이나 기구가 닿지 않도록 한다.
- 실습실로 이동 시에는 각 조의 dish(은박지로 감싸진 상태)를 가지고 이동하도록 한다.

참고자료

· 네이버 지식백과 두산백과, Cover glass
· 네이버 지식백과 두산백과, 슬라이드 글라스
· 네이버 지식백과 분자ㆍ세포생물학백과, 형광 현미경