생화학 실험/실습 보고서 (Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량)

소개

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목차

[1] 실험 목적
[2] 이론
[3] 실험 시약 및 기구
[4] 실험 방법
[5] 실험 결과
[6] 고찰
[7] 참고문헌

본문내용

[1] 실험 목적
수용액에 녹아있는 단백질을 Lowry-Folin법을 이용하여 정량하고 흡광도 그래프를 그리는 방법을 익힌다.

[4] 실험 방법
① BSA 표준곡선을 작성하기 위해 책(생물학 실험서, 실험6)의 표와 같이 BSA 표준용액을 제조하여 각각 시험관에 넣었다. (시험관 6개, 20~200μL 피펫 사용)
② 준비된 미지의 단백질 시료를 200μL 취해 시험관에 넣었다. (시험관 1개, 20~200μL 피펫 사용)
③ 0.25 M의 설탕용액, Urea, Tris-HCl을 각각 200μL씩 시험관에 넣었다. (시험관 3개, 20~200μL 피펫 사용)
④ 각 시험관에 2N NaOH 200μL, 반응액(1% (w/v) NaㆍK tartarate, 2% Na2CO3, 1% CuSO4 혼합물) 4mL를 가하고 vortex mixer를 사용하여 섞은 후 실온에서 10분간 방치했다. (20~200μL 피펫, 5mL 피펫 사용)
⑤ 후드에서 각 시험관에 Folin 시약 400μL씩 가하고 vortex mixer를 사용하여 섞은 후 다시 실온에서 약 3~40분간 방치했다. (100~1000μL 피펫 사용)
⑥ Well plate에 100μL씩 3회 분주한 뒤 (뚜껑을 덮어 각 시료 분주 위치 labeling), 570nm 파장에서 흡광도를 측정했다.
⑦ BSA 표준용액의 농도별 흡광도를 이용하여 그래프를 그리고 단백질 시료의 농도를 구한다.
*설탕 Urea, Tris-HCl의 흡광도 값과 그 의미를 유츄해본다.

<주의사항>
- 시험관의 시료가 헷갈리지 않도록 꼭 라벨링을 하도록 한다
- Pipet은 뒤집지 않도록 한다
- Pipet 사용 시, 다른 용액을 사용할 땐 반드시 피펫의 팁을 새 것으로 바꿔서 쓰도록 한다

참고자료

· 네이버 지식백과 생명과학대사전, Bradford method
· 네이버 지식백과 두산백과, Urea
· 네이버 지식백과 두산백과, 피펫 필러
· 네이버 지식백과 화학백과, 흡광도