LDH assay

소개

"LDH assay"에 대한 내용입니다.

목차

1. Introduction
2. Materials & Methods
3. Results
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1) Protein Purification
- 효소의 활성을 재는 것은 원래 여러 개의 섞여 있었던 물질들 중 하나인 특정 단백질만을 분리해서 그 단백질(효소)의 활성이 어떻게 되는가 쫓아가게 되는 것이다. 결국에는 효소의 활성이 가장 높은 것만 모아서 순도 있게 분리해낸다.(단백질 정제)
- 단백질 정제 과정 : 세포나 조직을 갈아서 만든 sample이 있을 때, 이 sample에는 다양한 종류의 단백질이 섞여 있어 원하는 단백질들을 분리하는 작업이 필요하다. 그래서 4가지 다른 양상의 원리를 이용한 크로마토그래피를 이용하여 단백질을 각 분획을 나눠 받게 된다. 이 분획에서 각각의 효소의 활성을 측정한 다음, 특정 부분을 분리해낸다. 그 sample들을 SDS-PAGE하면 단백질의 분자량(크기)이 큰 것은 느리게, 작은 것은 빠르게 양극 쪽으로 이동한다. 분리된 gel을 전기적으로 membrane에 이동시킨 다음, western blot 등의 방법에 의해 1차 항체, 2차 항체를 붙인다. 1차 항체는 우리가 원하는 단백질에 결합하는 특별한 항체이고, 2차 항체는 1차 항체를 인식하는 것으로, 1차 항체에 효소나 형광, 방사능 동위원소 등을 붙인다. 이를 이용하여 우리는 원하는 단백질을 검출해낼 수 있고, 이러한 과정에서 단백질의 순도는 점점 올라간다.
- column 크로마토그래피를 단계별로 지나가는 등 단백질의 정제 과정을 거치면서 순도는 점차 올라갈 것이다.
- 원하는 단백질은 가능한 한 많이 남겨두고, 원하지 않는 다른 종류의 단백질을 빼는 단백질 정제 과정에서 우리가 원하는 단백질도 일부 손상이 있을 수 있다. 즉, 100% recovery를 할 수 없다.

참고자료

· KATR 한국분석시험연구원, http://katr.re.kr/%EC%84%B8%ED%8F%AC%EB%8F%85%EC%84%B1%EC%8B%9C%ED%97%98-%EC%95%88%EB%82%B4/, 접속일 2021.05.13,
· 검색어 「Cytotoxicity」, 『Wikipedia』, https://en.wikipedia.org/wiki/Cytotoxicity, 접속일 2021.05.13.