GFP 단백질과 단백질 정량(Protein Measurements)

소개

"[일반생물학실험] GFP 단백질과 단백질 정량(Protein Measurements)"에 대한 내용입니다.

목차

Ⅰ. Abstract
Ⅱ. Introduction
Ⅲ. Materials and Methods
Ⅳ. Results
Ⅴ. Discussion
Ⅵ. References

본문내용

Ⅰ. Abstract
단백질 정량 방법 중 Lowry assay 와 Extinction coefficient assay 를 통해 단백질을 정량하고, 비교하는 과정에서 흡광도와 표준곡선의 의미를 이해하고자 수행한 실험이다. 단백질은 아미노산의 중합체로, 아미노산 사이에 펩타이드 결합이 반복되며 단백질이 형성된다. 이번 실험에서 사용한 단백질의 농도를 정량하는 방법은 특정 아미노산 또는 단백질의 흡광도를 이용하는 Extinction coefficient assay 와 표준곡선식과 750 nm 에서의 흡광도를 이용하는 Lowry assay 이다.
24 well plate 중 6개에 BSA의 농도가 0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08인 시료와 DIW에 EGFP를 넣은 시료를 준비한다. 이 6 개의 well 에 solution A 와 solution B 를 넣어 반응시킨다. 이 시료들을 cuvette에 넣고 750 nm에서의 흡광도를 측정한다. Cuvette에 PBS, 다른 cuvette에 PBS와 EGFP를 넣어 섞고, 488 nm에서의 흡광도를 측정한다.
표준곡선을 통해 계산한 EGFP 의 질량 농도는 1.72 g/L, Lambert-beer law 를 통해 계산한 EGFP 의 질량 농도는 0.925 g/L 이다. 이미 농도를 알고 있는 표준곡선을 통해 측정한 흡광도를 이용해 미지의 농도의 단백질의 농도를 구할 수 있다. 신뢰할 수 있는 표준 곡선이 그려진다면 이를 통해 구한 단백질의 농도도 신뢰할 수 있으므로, Lowry assay 방법을 사용하여 측정값의 정확도를 높일 수 있다.

Ⅱ. Introduction
단백질(protein)은 아미노산의 중합체이다. 아미노산은 카르복실기와 아미노기를 가지는데, 한 아미노산의 카르복실기와 다른 아미노산의 아미노기가 만나 물이 제거되며 결합하는 펩타이드 결합(peptide bond)이 반복되며 단백질이 만들어진다.

참고자료

· Martha R. Taylor(2021), 캠벨 생명과학 개념과 현상의 이해, 제 10판, 라이프사이언스, pp.47~49
· 김승호, 장규태(2006), 단백질실험노트 (상), 개정3판, 월드사이언스, p.24, pp.30~31
· 식물학백과, “녹색형광단백질”, https://terms.naver.com/list.naver?cid=62861&categoryId=62861,
· (2022.05.04)
· 물리학백과, “분광광도법”, https://terms.naver.com/list.naver?cid=60217&categoryId=60217,
· (2022.05.04)