A+ 생화학실험 <9주차. DNA Digestion & Gel Extraction> 레포트

소개

안녕하십니까.

생화학실험 PRE+MAIN 레포트 통합본입니다.
생화학실험 1등으로 A+ 받았습니다.

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목차

1. Title
2. Purpose
3. Theory
4. Chemicals & Apparatus
5. Procedure
6. Data & Result
7. Discussion
8. Reference

본문내용

1. Title
9주차. DNA Digestion & Gel Extraction

2. Purpose
제한효소를 사용하여 플라스미드 DNA를 절단하고, gel에서 절단한 DNA fragment를 추출한다.

3. Theory
3.1 제한효소 (Restriction enzyme)
3.1.1 제한효소의 역할
제한 효소는 DNA 사슬의 중간 부분에서 특정한 절단 부위(restriction site)를 인식하여 절단하는 endonuclease 범주에 속하며, restrictase라 부르기도 한다. 이들은 주로 박테리아나 고세균에서 바이러스로부터의 침입을 방어하는 메커니즘의 일부로 작용하며, 원핵 생물에서는 이들이 외부 DNA만을 선택적으로 절단하는 restriction digestion을 수행한다. 이 과정에서 host DNA는 메틸화 효소인 methyltransferase에 의해 메틸화 되는데, 메틸화 된 DNA는 제한 효소가 인식하지 못하므로 host DNA가 제한 효소에 의한 절단으로부터 보호를 받을 수 있다. 이 메커니즘으로 인해 숙주 세포는 자신의 DNA를 autodigestion으로부터 보호하며, 오직 외부로부터 침입한 비메틸화된 외부 DNA만을 제한 효소가 절단하게 된다. 제한효소는 DNA modification과 molecular cloning 분야에서 중요한 도구로 사용되며, 현재 3600종 이상이 알려져 있고 그 중 약 3000종이 연구되고 있으며 800종 이상이 상업적으로 활용되고 있다. 또, 제한효소는 horizontal gene transfer를 통하여 퍼져 나갔을 것으로 추정된다.

<중 략>

제한 효소는 특정 DNA 지점을 인식하고 절단하는 역할을 하며, 이 인식 부위는 대개 4~8염
기쌍(bp) 길이로, DNA 서열에서 회문 구조를 가진다. 제한 효소는 절단 과정에서 두 가지 유형의 DNA 말단을 생성할 수 있다.

참고자료

· Jeremy MB, John LT, Gregory JG, biochemistry 7th ed, Freeman, 2012, pp. 154~159