[미생물] 미생물(Amylase)의 분리와 배양, 보존법

소개

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미생물을 분리하고 배양하고 보존하는 법이 자세하게 조사되어 있습니다...

목차

1. 실험 제목

2. 실험 목적

3. 이론 및 원리
(1) 아밀라제(Amylase)
(2) 시료 채취
(3) Enrichment culture
(4) 도말평판법(Spread plate method)
(5) 균수의 측정(CFU, Colony Forming Unit)
(6) 균주 보존법

4. 실험 방법

본문내용

세포를 동결하여 대사활동을 정지시켜 장기간 생존하게 하는 보존법이다. 균체동결을 위하 여 냉동고, dry ice(약 -70 ), 액체질소(액상:-196 , 기체상:-150∼-170 )가 이용된다. 적 용범위가 넓은 보존법이지만, 세포는 동결에 의해서 장해를 받기 쉬우므로 동해방지제 (glycerol, 각종 당류, 탈지유, 혈청 등)를 첨가하기도 한다. 세포는 동결속도에 따라 상태가 달라지는데, 동결속도가 늦을 경우에는 세포 밖의 액만 얼 게 되고 세포 자체는 얼지 않으며, 반대로 동결속도가 빠르면 세포 내에도 얼음이 생기게 된다. 세포내 동결에 대해 저항서이 강한 미생물도 있으나, 일반적으로는 어떤 동결에 의해서도 장해를 받기 쉽다. 동해방지제는 세포 밖의 동결에 의한 장해를 방지하므로, 미생물의 경우 는 동해방지제를 첨가하고, -35 까지 매분 1 이하의 속도로 동결시키면 세포 내의 동결 은 크게 문제되지 않는다. 잘 생육·배양한 균체를 분산매에 109세포/㎖ 이상 포함하도록 현탁해서 멸균 스크류캡이 달린 소시험관(폴리플로필렌 제품인 셀람튜브가 사용하기 편하다.)에 옮겨 냉동고(-20 ∼ -85 )에서 동결건조한다. 분산매 조성은 여러 종류가 있는데 10%의 Glycerol과 Skim milk 등으로 가능한 한 전해질(NaCl 등)이 없는 것이 좋다. 보존온도는 낮은 편이 보존성의 측면 에서 좋다.

참고자료

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