인천대학교 나노바이오실험(1) A 자료) 4. Plasmid perp & Gel Electrophoresis

소개

✔ 인천대학교 나노바이오실험(1) '4. Plasmid perp & Gel Electrophoresis' 자료입니다.
✔ 나노바이오실험(1) 과목은 23년 1학기에 A0를 받았습니다.
✔ 표절률에 문제가 될 수 있으니 자료를 그대로 제출하지 마시고, 참고 용도로 사용하시길 바랍니다.
✔ 실험은 학기마다 약간씩 다르게 진행하기 때문에, 실험 수업에서 알려준 작성 필수 요소에 맞추어 작성하시고, 부가적으로 참고하시는 것을 추천드립니다. 제 답안 또한 오류가 있을 수 있고, 수업마다 채점 기준 또한 다르니 순수 정답 보다 과정을 위주로 확인하시면 충분히 도움 될 것 같습니다.

목차

1. 실험 일시 및 장소
2. 실험 도구
3. 이론
4. 실험 목표
5. 실험 방법
6. 결과
7. 고찰
8. 출처

본문내용

2. 실험 도구
- 실험 기자재 : 마이크로 피펫 & 마이크로 피펫 팁 (1000 μL, 200 μL), tube (10 mL, 50 mL), tube rack, 라텍스 장갑, microwave, UV lamp, nano drop, 전기영동장치, shaking incubator, vortex mixer, centrifuge, 스티로폼 박스, 삼각플라스크
- 시약 : E.coli 배양액, agarose powder, TAE buffer, 6X loading dye, isopropanol, 70% EtOH, gel electrophoresis buffer, EtBr, DW, P1, P2, P3 solution, ice

3. 이론
① Plasmid DNA
세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 DNA이다. 고리 모양을 띠고 있으며 세균의 생존에 필수적인 유전자는 아니다. 유전공학에서는 세균 내 플라스미드를 세포 밖으로 빼내고 제한효소로 끊은 뒤, 필요로 하는 유전자를 삽입하여 이를 다시 세균에 넣어 배양하는 유전자재조합 기술을 사용한다.
② Plasmid DNA를 추출하는 방법
Ⅰ. 크기 차이를 이용한 plasmid 추출 및 정제 방법
유전체 DNA가 절단되지 않도록 매우 조심히 수행하여야 한다. 먼저, EDTA, 라이소자임 및 25% 자당(sucrose) 용액을 처리하여 세포벽이 부분적으로 파괴된 원형질체를 형성한 후, 비이온성 계면활성제인 Triton X-100을 첨가하여 세포를 용해시킨다. 이후, 원심분리를 통해 상층액에 있는 플라스미드를 추출하게 된다.

참고자료

· 실험 미생물학, 라이프사이언스, 2013
· 최신 미생물학 실험, 고려의학, 2017
· 기본 의약 미생물학 및 실험, 바이오사이언스
· Brock의 미생물학, Brock, 바이오사이언스