서강대 화공생명공학실험1 A+ < Enzyme kinetics > 레포트

소개

Pre와 Main 레포트가 합쳐진 통합본입니다.
레포트 총점 1등으로 "A+" 받았습니다.
해당 레포트 감점없이 만점 받았습니다.

목차

<Pre-Report>
1. 실험 목적
2. 배경 이론
3. References

<Main Report>
1. 실험 방법
2. Data & Results
3. Discussion
4. Conclusion
5. References

본문내용

1. 실험 목적
Michaelis-Menten 방정식을 통하여 효소의 메커니즘과 반응 속도론을 이해한다. 경쟁적 저해제의 첨가에 따른 KM, KI의 변화를 알아본다.
2. 배경 이론
2.1 효소 (Enzyme)
효소는 생명체 내에서 가장 탁월한 촉매이다. 촉매는 반응의 활성화 에너지를 낮추어 반응속도를 상승시키는 화학물질로, 반응 과정에서 변하거나 소모되지 않는다. 효소는 생명체의 중요한 화학 반응들이 알맞은 속도로 일어나게끔 돕는다. 효소는 특이성이 강하여 대게 하나의 단일 화학반응이나 밀접히 관련된 일련의 반응들을 촉매한다. 단백질로 구성된 효소는 반응물 기질을 선택하는데 있어 매우 높은 특이성을 보인다. 대부분의 효소는 활성을 갖기 위해 보조 인자가 필요하다. 보조 인자의 종류에는 금속 이온 (Ca2+, Mg2+, Cu2+ 등)과 유기물질 (NAD, FAD 등) 등이 있다.

<중 략>

4. Conclusion
이번 실험에서는 ethanol의 산화 반응을 촉매하는 YADH 효소에 대한 assay를 진행하였다. YADH 효소는 조효소로 NAD+가 필요하며, NAD+와 ethanol의 반응 결과로 ethanol이 산화된다. ethanol과 구조적으로 유사한 2,2,2 -trifluoroethanol을 competitive inhibitor로써 넣어 효소의 촉매 작용에 대한 저해제의 영향을 확인하고자 하였다. Lineweaverburk plot을 그려 Vmax, KM을 구하고, 초기속도, Vmax, KM, Kcat의 변화를 확인하였다. 저해제의 농도가 증가함에 따라 Vmax는 일정, KM은 증가, Kcat은 감소해야 했으나, 그 경향성이 저해제 농도 0mM에서 5mM로 증가할 때는 성립했으나, 5mM에서 10mM로 증가할 때는 성립하지 않았다. 이러한 오차가 발생한 원인에 대한 분석을 진행하였으며, 그 결과 trendline의 부정확성, 온도 차이, 실험자에 의한 오차 발생 등이 원인으로 분석되었다.

참고자료

· Taber, L Richard. “The competitive inhibition of yeast alcohol dehydrogenase by 2,2,2-trifluoroethanol”. Biochemical Education 26.3. 1998. 239-242p.
· MK Campbell, SO Farrell. “Biochemistry”. 6ed. life science. 2007. 152-165p.
· Kuznetsev AV, Gnaiger E, Laboratory Protocol Lactate Dehydrogenase Cytosolic Marker Enzyme, Oroboros Instrumnets Corp, 2010, p. 8
· S Sarcar, T K Jain, A Maitra, Activity, and stability of yeast alcohol dehydrogenase (YADH) entrapped in aerosol OT reverse micelles, Biotechnol Bioeng, 1992, 20;39(4), p. 474-478.
· Mary K. Campbell, Biochemistry, Life Science, 2015, pp 156-158