Cryopreservation of mammalian cells A+레포트

소개

Cryopreservation of mammalian cells A+레포트입니다.

목차

1. Title

2. Purpose

3. Materials

4. Methods

5. Results

6. Discussions

7. Project
(1) 또 다른 cryoprotective agent (cryoprotectant)에는 어떤 것들이 있을까?

8. Reference

본문내용

4. Purpose
세포를 장기간 계대배양을 하게 되면 오염으로 인해 세포가 소실되거나 돌연변이가 생겨날 수 있다. 따라서 이를 대비하기 위해 미리 충분한 양의 세포를 확보하고, 장기간 안정하게 유지·보관할 수 있도록 cell stock을 만들어 동결 보존시킨다.

5. Materials
MCF-7 Cells (cultured in T25 flask), DPBS, 0.05% Trypsin-EDTA solution, Media (RPMI1640, FBS, P/S), DMSO, alcohol lamp, micropipette, tip, rack, beaker, 1.5㎖ ep-tube, cryogenic vial, 70% ethanol, tissue, incubator, centrifuge, clean bench, (2-propanol, cryo freezing container, liquid nitrogen container)

6. Methods
① 4℃에서 냉장보관 중이던 media를 37℃ water bath에서 충분히 pre-warmed.
② Clean bench에 넣기 전, pre-warmed media 및 필요한 실험기구들을 70% 에탄올로 소독한다. (Cell이 들어있는 flask는 에탄올로 소독하지 않고 clean bench로 옮겨준다.)

참고자료

· 의생명과학 실험서, 이종호, 라이프사이언스, 2021, p. 31, 32
· 의생명과학 실험서, 이종호, 라이프사이언스, 2021, p. 23, 160~166
· TaKaRa - 세포배양시 Mycoplasma 오염, 꼭 확인하세요!
· https://www.takara.co.kr/web01/product/productList.asp?lcode=D180717
· BIONICS - Mycoplasma test
· http://www.bionicsro.co.kr/contents/serviceMycoplasmatest
· ThermoFisher SCIENTIFIC - Freezing Cells
· https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/references/gibco-cell-culture-basics/cell-culture-protocols/freezing-cells.html
· CHEMYX - Technical Problems Caused by Air Bubbles in Microfluidic Systems
· https://chemyx.com/support/knowledge-base/application-reference-by-topic/technical-problems-problems-caused-by-air-bubbles-in-microfluidic-systems-2/
· NIH - Cryopreservation: An Overview of Principles and Cell-Specific Considerations
· https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7995302/
· PubMed - Unexpected low-dose toxicity of the universal solvent DMSO
· https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24327606/
· NIH - Cryoprotectant Toxicity: Facts, Issues, and Questions
· https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4620521/