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마우스 Blood cell 분리 및 면역세포 관찰실험(A+) giemsa staining, 마우스 복막 절제_복막 macrophage isolation, 마우스 해부(림프절 관찰 및 채취), Bone marrow cell isolation

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한컴오피스
최초등록일 2023.11.03 최종저작일 2022.11
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마우스 Blood cell 분리 및 면역세포 관찰실험(A+) giemsa staining, 마우스 복막 절제_복막 macrophage isolation, 마우스 해부(림프절 관찰 및 채취), Bone marrow cell isolation
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    소개

    "마우스 Blood cell 분리 및 면역세포 관찰실험(A+) giemsa staining, 마우스 복막 절제_복막 macrophage isolation, 마우스 해부(림프절 관찰 및 채취), Bone marrow cell isolation"에 대한 내용입니다.

    목차

    1. 실험날짜
    2. Blood cell 분리 및 면역세포 관찰
    3. 실험방법
    4. 시약 및 기구
    5. 결과
    6. discussion
    7. References

    본문내용

    LPS 처리시 면역 활성화 되면서 백혈구의 증식이 일어나기 때문에 보라색이 많은 2조가 LPS가 처리된 것이라고 판단했다.(김사염색이 더 잘 된다) 색 뿐 만아니라 body의 있는 세포의 수만을 비교하더라도 2조의 세포가 훨씬 더 많았다.

    시약: 쥐, 김사 염색약, 증류수, 메탄올
    기구: 광학 현미경, 피펫, 팁, 마우스 케이지, 26gage의 바늘과 주사기, 가위, EP tube, 슬라이드 글라스

    과정
    1) Mouse 꼬리에서 2 mm 정도의 혈액을 채취한 후 슬라이드에 떨어뜨린다.
    2) 슬라이드 위의 혈액을 다른 슬라이드를 이용하여 얇게 도말한다.
    3) 메탄올을 이용하여 세포를 2분동안 고정한다.
    4) 김사 염색약을 떨어뜨린 뒤 10분간 세포를 염색시킨다.
    5) 증류수를 흘려주어 세포 외 주변 염색을 제거한다.
    6) 건조 후 슬라이드에 커버글라스를 덮어준다.(이 때 물방울이 들어가지 않도록 주의한다)
    7) 현미경으로 세포 특징이나 형태를 관찰한다.
    8) 사진 속 세포 종류를 판단하고 분류한다.

    참고자료

    · Claassen V. Neglected factors in pharmacology and neuroscience research. In Techniques in the Behavioural and Neural Sciences, vol. 12, Huston JP (ed.). Elsevier: Amsterdam, 1994
    · 척추 동물 해부학 실습, 김완종, 정문각, 1998
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    • 1. Giemsa 염색을 이용한 혈액세포 관찰
      Giemsa 염색은 혈액세포 형태학적 분석에 있어 가장 기본적이면서도 필수적인 기법입니다. 이 염색법은 적혈구, 백혈구, 혈소판 등 다양한 혈액세포를 명확하게 구분할 수 있게 해주며, 세포의 핵과 세포질의 구조를 상세히 관찰할 수 있습니다. 특히 백혈구의 분류와 형태적 이상을 진단하는 데 매우 유용하며, 임상 진단에서 혈액질환 판정의 첫 단계로 널리 사용됩니다. 다만 주관적 해석의 여지가 있고 숙련도에 따라 결과가 달라질 수 있다는 점이 제한점입니다. 현대에는 자동화 분석기와 함께 사용되어 진단의 정확성을 높이고 있습니다.
    • 2. 복강 대식세포 분리 및 배양
      복강 대식세포는 선천면역의 핵심 세포로서 염증반응과 항원제시에 중요한 역할을 합니다. 복강액 수집을 통한 대식세포 분리는 상대적으로 간단하면서도 높은 순도의 세포를 얻을 수 있는 장점이 있습니다. 배양 과정에서 세포의 활성화 상태를 조절할 수 있어 M1/M2 극성화 연구에 적합합니다. 다만 개별 동물 간 세포 수와 활성화 상태의 변이가 크고, 장기 배양 시 세포의 특성 변화가 발생할 수 있습니다. 면역학 연구에서 매우 유용한 모델 세포이며, 지속적인 품질 관리가 필요합니다.
    • 3. 골수세포 분리 및 특성
      골수는 조혈줄기세포와 다양한 면역세포의 원천으로서 혈액 및 면역계 연구에 매우 중요합니다. 골수세포 분리는 조혈 과정과 면역세포 분화를 연구하는 데 필수적이며, 다양한 세포 집단을 포함하고 있어 세포 이질성 연구에 적합합니다. 골수 유래 대식세포(BMDM)와 골수 유래 수지상세포(BMDC) 등은 표준화된 분화 프로토콜로 대량 생산이 가능합니다. 다만 골수 채취 과정의 침습성과 세포 손상 위험, 그리고 개체 간 변이가 존재합니다. 면역질환 모델링과 세포치료 연구에 광범위하게 활용되고 있습니다.
    • 4. LPS 자극에 의한 면역반응 활성화
      LPS(리포폴리사카라이드)는 그람음성균의 외막 성분으로서 TLR4를 통해 강력한 선천면역 반응을 유도합니다. LPS 자극은 대식세포와 수지상세포에서 TNF-α, IL-6, IL-12 등 염증성 사이토카인의 분비를 촉발하며, 이는 적응면역 반응의 시작점이 됩니다. 이 모델은 패혈증, 내독소혈증 등 임상 질환의 기전 연구에 매우 유용합니다. 다만 과도한 LPS 자극은 세포독성을 유발할 수 있고, 농도와 시간에 따른 세밀한 조절이 필요합니다. 면역학 기초연구와 신약 개발에서 표준적인 활성화 모델로 널리 사용되고 있습니다.
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