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Identification of Novel Bacterial species (새로운 박테리아 종 동정)을 위한 DNA Extraction (DNA 추출) (A+ 평가자료)

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최초등록일 2023.05.19 최종저작일 2022.04
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Identification of Novel Bacterial species (새로운 박테리아 종 동정)을 위한  DNA Extraction (DNA 추출) (A+ 평가자료)
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    소개

    새로운 세균 동정 목적으로, DNA extraction 과정을 진행하였습니다.

    DNA extraction method와 Result를 분석하고
    Nano Drop 결과를 해석하였습니다.
    오차에 대한 원인 분석, 바이러스와 다른 차이점, 등을 기재하였습니다.
    DNA 추출에 사용된 시약들의 역할 및 원리를 Project 내용으로 기재했습니다.

    목차

    1. Title
    2. Purpose
    3. Material
    4. Method
    5. Results
    6. Discussion
    7. Projects
    8. Reference

    본문내용

    Ⅷ. Discussion
    본 실험 결과에서의 Nano Drop 결과를 260/280 ratio와 260/230 ratio로 분석해보았을 때 순수한 DNA를 정량적으로 추출했다고 판단할 수는 없었고, 일반적인 수치보다 적은 수치를 보인다는 점에서 Sample이 오염이 되었다는 점을 확인할 수 있었다. 이에 실험 과정과 원리를 통해서 정량적으로 순수한 DNA를 extraction하지 못했던 이유에 관하여 고찰해볼 수 있었다.

    <중 략>

    본 실험 과정으로 핵산을 분리하는 과정을 전반적으로 이해해볼 수 있었으나, 실험에서 사용된 균주의 DNA를 추출하였다는 점에서 추가적인 궁금점을 가져볼 수 있었다. 본 실험에서 배양된 세균을 이용하여 DNA를 추출할 수 있었던 것과는 다르게, 구조와 형태가 다른 바이러스의 경우에는 DNA를 어떻게 추출할지에 관한 궁금증, DNA의 추출과 RNA의 추출에는 추출과정에 어떤 차이가 존재할지에 관한 궁금증이 들어 조사를 통해 확인하고, 본 실험과 비교해볼 수 있었다.
    바이러스의 경우에는 세균과는 다르게, 단순한 구조로 핵산과 캡시드라는 겉껍질의 단백질로 이루어져 있다 . 바이러스 DNA를 extraction하는 방법을 간략히 정리하면 다음과 같다. 먼저, 바이러스 입자가 녹아있는 수용체에 페놀을 섞어주고, chloroform을 첨가하여 단백질 막과 분자들을 분해, 변성시킨다. 이에 층이 구분되고, 상층액에 DNA가 녹아 존재하므로, 에탄올을 첨가한 후 완충용액에 녹이는 과정을 거쳐 DNA extraction sample을 얻을 수 있다 . 세균과는 차이점으로 외피가 존재하지 않아 SDS처리를 하지 않아도 된 점을 이야기해 볼 수 있고, DNA 바이러스를 사용하였을 경우 RNase A를 필요로 하지 않는다는 점도 확인해 추론해볼 수 있었다.

    참고자료

    · NanoDrop Nucleic Acid Handbook, Thermo Fisher SCIENTIFIC, p. 12, 14
    · Biotechnological applications of the sepiolite interactions with bacteria: Bacterial transformation and DNA extraction, Applied clay science, Fidel Antonio Castro-Smirnov 외 5인, Elsevier, 2020, pp. 2~3
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    · Phenol: Chloroform + Tris Buffer, Thermo Fisher SCINETIFIC, PCI
    · https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/17909
    · 화학대사전 (네이버 지식백과), 세화, 2001, 페놀법
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    · 생화학백과 (네이버 지식백과), 생화학분자생물학회, 도데실 황산 나트륨
    · https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5733282&cid=60266&categoryId=60266
    · 생명과학대사전 (네이버 지식백과), 강영희, 여초, 2014, 브롬화세틸트리메틸암모늄
    · https://terms.naver.com/entry.naver?docId=2692337&cid=60261&categoryId=60261
    · 화학백과 (네이버 지식백과), 대한화학회, 클로로폼
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    · 두산백과 (네이버 지식백과), 서울대학교 아시아연구소, 염화나트륨수용액
    · https://terms.naver.com/entry.naver?docId=1127010&cid=40942&categoryId=32263
    · 생명과학대사전 (네이버 지식백과), 강영희, 여초, 2014, 리보핵산가수분해효소 A
    · https://terms.naver.com/entry.naver?docId=425504&cid=60261&categoryId=60261
    · 화학대사전 (네이버 지식백과), 세화편집부, 세화, 2001, 리소자임(라이소자임)
    · https://terms.naver.com/entry.naver?docId=2285337&cid=60227&categoryId=60227
    · 화학백과 (네이버 지식백과), 대한화학회, 에탄올
    · https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5827419&cid=62802&categoryId=62802
    · 위키백과, SSC buffer
    · https://en.wikipedia.org/wiki/SSC_buffer
  • AI와 토픽 톺아보기

    • 1. DNA 추출 과정
      DNA 추출 과정은 생물학 연구에서 매우 중요한 단계입니다. 이 과정을 통해 유전 물질인 DNA를 분리하여 분석할 수 있습니다. DNA 추출 과정은 세포 용해, 단백질 제거, DNA 침전 및 정제 등의 단계로 이루어집니다. 각 단계에서 적절한 시약 사용과 조건 조절이 필요하며, 오염을 최소화하기 위한 주의가 요구됩니다. DNA 추출 과정의 정확성과 효율성은 후속 실험의 성공에 큰 영향을 미치므로, 이 과정에 대한 깊이 있는 이해와 숙련도가 중요합니다.
    • 2. DNA 추출 시약의 역할
      DNA 추출 과정에서 사용되는 다양한 시약들은 각각 고유한 역할을 합니다. 세포 용해 시약은 세포막을 파괴하여 세포 내부의 DNA를 노출시키고, 단백질 분해 효소는 단백질을 제거하여 순수한 DNA를 얻을 수 있게 합니다. 염화나트륨이나 에탄올과 같은 침전 시약은 DNA를 선택적으로 침전시켜 분리할 수 있게 해줍니다. 이러한 시약들의 적절한 사용과 농도 조절은 DNA 추출 과정의 효율성과 순도에 큰 영향을 미칩니다. 따라서 각 시약의 특성과 역할을 이해하고 최적의 조건을 찾는 것이 중요합니다.
    • 3. DNA와 RNA 추출 방법 비교
      DNA와 RNA는 모두 유전 정보를 저장하는 중요한 생체 분자이지만, 화학적 구조와 특성이 다르기 때문에 추출 방법이 다릅니다. DNA 추출은 세포 용해, 단백질 제거, DNA 침전 및 정제 등의 단계로 이루어지지만, RNA 추출은 세포 용해, RNA 안정화, RNA 분리 및 정제 등의 단계로 진행됩니다. RNA는 DNA보다 화학적으로 불안정하므로 RNase 효소 활성을 억제하는 것이 중요합니다. 또한 RNA 추출 시 DNA 오염을 방지하기 위한 추가 단계가 필요합니다. 이처럼 DNA와 RNA 추출 방법은 분자의 특성에 따라 차이가 있으며, 각각의 목적에 맞는 최적화된 프로토콜이 요구됩니다.
    • 4. DNA 추출 과정의 오염 가능성
      DNA 추출 과정에서 오염 가능성은 매우 중요한 문제입니다. 오염은 실험 결과의 신뢰성을 저하시키고 후속 분석에 심각한 영향을 미칠 수 있습니다. 오염의 주요 원인으로는 시약 및 기구의 불순물, 작업 환경의 미생물 오염, 실험자의 잘못된 작업 등이 있습니다. 이를 방지하기 위해서는 무균적인 작업 환경 유지, 고순도의 시약 사용, 철저한 세척 및 멸균 절차 준수, 실험자의 주의 깊은 작업 등이 필요합니다. 또한 추출된 DNA의 순도 및 농도 확인을 통해 오염 여부를 확인하는 것이 중요합니다. 이러한 노력을 통해 DNA 추출 과정의 오염을 최소화하고 실험 결과의 신뢰성을 확보할 수 있습니다.
    • 5. DNA 농도 및 순도 측정
      DNA 추출 후 농도와 순도를 정확히 측정하는 것은 매우 중요합니다. DNA 농도는 후속 실험에 필요한 적절한 양의 DNA를 확보하는 데 필수적이며, 순도는 실험 결과의 신뢰성에 직접적인 영향을 미칩니다. 일반적으로 UV 분광광도계를 이용하여 260nm 흡광도를 측정함으로써 DNA 농도를 확인할 수 있습니다. 또한 260/280nm 흡광도 비율을 통해 단백질 오염 정도를 확인할 수 있습니다. 이 외에도 형광 염료를 이용한 정량 분석, 전기영동을 통한 확인 등 다양한 방법이 활용됩니다. 정확한 DNA 농도와 순도 측정은 후속 실험의 성공을 위해 필수적이므로, 이에 대한 이해와 숙련도가 중요합니다.
  • 자료후기

      Ai 리뷰
      본 실험에서는 미지의 세균 균주를 이용하여 DNA를 추출하고, 분광광도계를 통해 DNA의 순도를 확인하였습니다. 실험 과정에서 발생할 수 있는 다양한 오염 요인과 효소 활성 저하 등의 문제점을 분석하고, 개선 방향을 제시하였습니다.
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