서울대학교 생화학실험 - 동물세포 배양 & Transfection (실험3) 결과레포트

소개

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Subculture
Transfection
BCA assay / luciferase assay

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Methods and Materials
4. Results & Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
이번 실험에서 3주에 걸쳐 동물세포의 배양과 transfection의 원리를 학습한다. 8주차엔 배양된 동물세포를 transfection 할 수 있도록 plating했고, 남는 cell을 subculture 하였다. 9주차엔 plating된 cell을 cationic polymer를 이용해 transfection 하였다. 마지막으로, 10주차 실험에서 transfection된 sample을 lysis 하고, BCA assay 및 luciferase assay로 이를 분석하였다. luciferase assay 분석 결과, transfection은 잘 되었으나 BCA assay로 측정한 단백질 농도는 media 속 impurity 등의 문제로 오차가 발생한 것으로 추정된다.

2. Introduction
생화학 연구에 있어서, 특정 transgene을 가진 cell line을 얻는 것은 중요하다. 이는 특정한 gene product를 얻고 분리해야 하기 때문일 수도 있고, 특정 gene을 가진 세포를 대상으로 실험을 진행해야 되기 때문일 수도 있다. Vector 속에 원하는 transgene을 prokaryote에 수행하는 경우 transformation이라 부르고, eukaryote에 수행하는 경우 transfection이라고 부른다. E.Coli와 같은 prokaryote은 doubling time이 짧고, 비교적 간단한 생물이므로 HeLa cell과 같은 복잡한 cell보다 다루기 편하다. 그러나, eukaryote은 PTM과 같이 prokaryote이 가지지 못한 복잡한 mechanism을 가지고 있으며, 연구에 이런 mechanism이 필요한 경우 transformation 대신 transfection을 진행해야 한다. 실험3의 실험들을 3주 동안 수행함으로써, transfection을 수행하는 방법과 결과 분석법을 학습할 수 있었다.

참고자료

· Matt Carter, Jennifer C. Shieh, Guide to Research Techniques in Neuroscience Academic Press: Burlington, 281-296 (2010).
· Thomas V. Ramos et al. Standardized Cryopreservation of Human Primary Cells. Curr. Proto. Cell Biol. 64, A.31.1-A.31.8 (2014).
· Agnieszka Fus-Kujawa et al. An Overview of Methods and Tools for Transfection of Eukaryotic Cells in vitro. Front. Bioeng. Biotechnol. 9, 1-15 (2021).
· H. David Chapman et al. A Selective Review of Advances in Coccidiosis Research. Adv. Parasitol. 83, 93-171 (2013).
· David P. Clark, Molecular Biology (2nd Edition) Academic Press: 194-226 (2013).
· Yuanming Zhang et al. Adenovirus Receptors. Jour. Virol. 79(19), 12125-12131 (2005).
· Molly B.James et al. Nuclear-Associated Plasmid, but Not Cell-Associated Plasmid, Is Correlated with Transgene Expression in Cultured Mammalian Cells. Mol. Ther. 1(4), 339-436 (2000).