[유전공학실험] A+레포트 / RNA 분리정제 및 cDNA 합성 (RNA prep and cDNA synthesis) 실험레포트

소개

"[유전공학실험] A+레포트 / RNA 분리정제 및 cDNA 합성 (RNA prep and cDNA synthesis) 실험레포트"에 대한 내용입니다.

목차

1. 실험 목적

2. 실험 이론
1) RNA의 분리
2) cDNA

3. 준비물
1) 실험 기기
2) 재료 및 시약

4. 실험 방법
1) RNA extraction
2) cDNA synthesis

5. 실험 결과
1) RNA extraction Nanodrop 측정 결과

6. 논의 및 고찰
1) RNA 추출 과정에서 70% 에탄올을 사용하는 이유는 무엇인가?

본문내용

2. RNA 분리의 과정
사진7-2. TRIzolⓇ을 이용한 식물세포의 RNA 분리 과정
RNA를 분리하는 방법에는 여러 가지가 개발되었는데, 그 기본 원리중 하나는 guanidium hot-phenol 방법이다. 이 방법은 산성 조건하의 4M guanidine thiocyanate를 포함하는 용액 속에서 RNA는 수용액상에 위치하고, DNA와 단백질은 페놀-클로로포름의 유기 용매상에 위치한다는 특징을 이용한다. 이 원리를
이용하여 최근에 많이 사용되는 방법은 페놀과 guanidine isothiocyanate를 하나의 시약으로 만든 것을
이용하는 것이다. 이 용액에 클로로포름을 첨가하면 두 번째로 유기 액상을 형성하게 되는데, 여기에 DNA
와 단백질이 존재하게 되고, RNA는 수용성의 상층액에 존재하게 된다. 이때 DNA와 단백질은 각각 에탄올과 아이소프로판올 침전법으로 추출할 수 있다. 이 방법은 매우 간편하고 빠르게 많은 시료로부터 동시에 RNA를 분리할 수 있게 해주고, 추출된 RNA의 회수율과 순도가 높다. 또한 모든 종류의 생물체로부터
RNA를 분리할 수 있는 장점이 있어 많은 실험실에서 이용되고 있다, 반면 사용되는 시약들이 유해물질이고 DNA에 오염될 가능성이 있다는 단점이 있다. 이런 시약 종류로서 상용화된 것 중 대표적인 것은
TRIzolⓇ이다. 또 다른 기본 원리에는 Anion-exchange를 이용한 방법이 있다. 양전하를 띤 DEAE(Diethlyaminoethyl
cellulose)와 음전하를 띤 RNA와의 상호작용을 이용한 분리 방법으로 음이온 교환 수지는 실리가 비드로
구성되어 넓은 구멍과 높은 전하밀도를 가지고 친수성으로 표면이 코팅되어있다. 사용되는 buffer와 pH
조건, 염분 조건에 따라 RNA를 결합시키거나 용출시킬 수 있다. 이 방법은 유전체 DNA와 RNRA를 함께
정제할 수 있어서 유용하다. 양전하를 띠는 실리카 입자와 음전하를 띠는 RNA와의 친화도를 이용할 수도 있다.

참고자료

· 없음