Reverse transcription and quantitative PCR ( A 학점 )

소개

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목차

Ⅰ.Introduction

Ⅱ. Method - [실험]Plasmid isolation
A.Laboratory equipment
B.Reagent
C.Method

Ⅲ. Result

Ⅳ. qPCR 결과
1.Melting curve plot
2.Amplification plot
3.Sample 사진

Ⅴ. Discussion

Ⅵ. 주의사항

본문내용

Introduction
이번 실험의 목표는 세포 또는 조직 내 특정 분자의 기능을 연구하기 위하여 DNA-RNA-protein 수준(level)에서 변화를 측정하는 실험들을 수행하기 위함이다. 샘플 군 간 특정 RNA의 발현량 차이를 조사하기 위하여 mRNA를 추출한 후 reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) 분석을 한다. 이번 실험에서는 그 두번째 과정으로 mRNA로부터 cDNA을 생성하고, qPCR 분석을 수행하는 과정을 이해하고자 한다.

<중 략>

Discussion
<실험 결과 오차 이유>
RT mixture를 만드는 과정에서 mRNA를 2ug을 추출하였는데, 이 과정에서 정확히 2ug에 해당하는 용액을 추출하는 것이 불가능하여 근사값으로 진행하였다.
실험 과정은 주로 pipette 조작과 기계 조작으로 이루어져 있으며, 위에서 말한 오차의 영향은 상대적으로 적을 것이기에, 실험 결과의 문제는 pipette 조작과 기계 조작으로 생긴 오차의 영향이 크다.
기계 조작은 실험원들이 진행하지 않았기에 pipette 조작 미숙만 고려해서 discussion을 하자면,
첫째, 시약이 pipette tip에서 완전히 나갈 수 있도록 조작하지 못했을 가능성이 있다.
둘째, 시약을 pipette으로 옮길 때 step 2 까지 흡입하여 정량을 넘게 분주했을 가능성이 있다.
셋째, pipette 사용시 생긴 기포에 의해 정량 분주가 되지 않았을 가능성이 있다.

참고자료

· Reverse Transcriptase Reaction https://www.youtube.com/watch?v=MzIX7iluFcI