제한효소를 이용한 Restriction of DNA 예비레포트 [A+]

목차

1. 실험목적
2. 바탕이론
3. 기구 및 시약
4. 실험방법
5. 참고문헌

본문내용

1. 실험 목적
- 제한효소를 이용하여 DNA를 자르고, 잘려진 DNA의 단편의 크기를 Agarose-gel 전기영동을 통해 분석한다. 그리고 Agarose-gel 전기영동 장치의 원리를 이해하고, 사용법을 숙지한다.

2. 바탕 이론
(1) 플라스미드 DNA (Plasmid DNA)
- 플라스미드 (Plasmid) 는 생장에 필수적인 염색체 (Chromosome) DNA에서 물리적으로 분리되어 있으며 독자적으로 증식할 수 있는 작은 원형의 DNA 분자이다. 1952년 미국의 유전학자 J.레더버그가 최초로 플라스미드를 세균의 염색체 이외의 독자적으로 증식할 수 있는 DNA 분자라고 명명하였다. 박테리아 염색체는 평균 수백만 kb이지만 플라스미드는 대개 1 kb~ 200 kb 이내이며, 원형의 이중가닥인 DNA로 구성되어 있다. 플라스미드는 박테리아의 성장에 꼭 필요한 요소는 아니지만 항생제 내성과 같이 박테리아가 살아가는데 도움을 주는 유전자를 가지고 있다. 플라스미드는 접합이나 형질전환, 형질도입과 같은 수평적 유전자전달에 의해 한 박테리아에서 다른 박테리아로 이동할 수 있다. 또한 유전자클로닝의 벡터로 이용할 수 있어 유전자재조합 DNA기술을 발전시키는데 큰 역할을 하였다.
클로닝에 사용하는 플라스미드 벡터에는 다음 Fig 2.와 같이 DNA 복제원점과, 삽입유전자의 존재유무를 구별할 수 있는 벡터, 제한효소로 플라스미드를 자르고 원하는 유전자를 삽입하는 다중클로닝 부위 (Multiple Cloning Site, MCS)가 있다. 적절한 제한효소로 플라스미드를 자른 뒤 동일한 제한효소로 자른 유전자를 삽입할 수 있다. 플라스미드에 클로닝 가능한 DNA 절편의 크기는 최대 15kb 정도이다. 이러한 플라스미드를 형질전환을 이용해 박테리아에 삽입한 뒤 박테리아를 배양하면 원하는 유전자를 많은 양 얻을 수 있다.

참고자료

· Polisky, B.; 외. “Specificity of substrate recognition by the EcoR I restriction endonuclease” , PNAS 72 (9): 3310–3314. (1975).
· Watson, Molecular biology of the gene, Pearson Benjamin Cummings, Cold Spring Harbor Laboratory Press.
· [네이버 지식백과] 플라스미드 (분자,세포생물학백과) 제한효소 (두산백과)