미생물 항생제 감수성 측정법 리포트

목차

1. 실험목적
2. 재료 및 장비
3. 실험원리
4. 실험과정
5. 출처

본문내용

실험목적
: 항생제의 최소 억제 농도(MIC)를 이해할 수 있다.

재료 및 장비
1) 항생제
kanamycin, ampicillin, chloramphenicol를 사용하였다.

2) 배지
LB 배지 (Luria-Bertani broth) : 박테리아 성장에 주로 사용된다. 효모로 부터 추출되어 미생물이 생장하는데에 필요한 여러가지 영양물질이 함유된 효모 추출물, 우유단백질인 카세인을 분해하여 단백질 공급원이 되는 Tryptone, 배양할 세포가 삼투에 의하여 터지지 않도록 해주는 염화 나트륨을 첨가하여 만든다. 액체배지, 고체배지로 모두 가능하며 고체배지로 만들경우 한천을 첨가하여 만든다. LB 배지 조성에 추가로 암피실린이라는 항생제를 첨가하여 LA 배지를 만든다. 이는 형질전환(Transformation) 실험시 원하는 Plasmid가 삽입된 세포를 Selection하는데 사용될 수 있다.
형질전환 시에 사용할 Plasmid Vector에 Ampicillin에 저항성을 갖는 유전자가 들어있는데, 이러한 Vector를 형질전환할 세포와 함께 섞어둔 후 Vector가 세포 안에 들어갈 수 있도록 유도하는 과정을 거친다. 성공적으로 Vector를 받아들인 세포는 항생제인 Ampicillin에 저항성을 갖게 된다. 하지만 형질전환시 모든 세포가 Vector를 세포 내에 갖고 있는 것이 아니므로, Vector가 성공적으로 들어간 세포를 따로 분리할 필요가 있다. 그래서 형질전환 과정을 거친 세포를 Ampicillin이 들어있는 LA 배지에서 배양한다. 이렇게 하여 세포 내에 Vector가 없어 Ampicillin 저항성 유전자가 없는 세포는 죽고, 세포 내에 Vector가 있어 Ampicillin 저항성 유전자를 가진 세포만이 Colony로 나타난다.
이를 통해 LA배지에서 자란 세포들은 Ampicillin 저항성 유전자(AmpR)가 삽입된 Vector를 갖고 있고, 의도한 형질전환에 성공했다고 볼 수 있다.

참고자료

· 간호대학사전-액체희석법
· 식품과학기술대사전-항균력검정법
· 두산백과-감수성 검사
· 질병관리청-항생제 내성균
· 서울아산병원-항생제 감수성 검사
· Benson's Microbiological Applications (저자 : Aifred Brown and Heidi Smith)
· A.W., Perry, D.M., and Kirby, W.M.M. 1959. Single disc antibiotic sensitivity testing of Staphylococci. A.M.A. Arch. Intern. Med. 104, 208–216.
· Clinical Laboratory Standards Institute. 2006. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests; Approved standard—9th ed. CLSI document M2-A9. 26: 1. Clinical Laboratory
· Hudzicki, J. 2009. Kirby-Bauer disk diffusion susceptibility test protocol. https://www.asmscience.org/content/education/protocol/protocol.3189