분자유전학실험레포트(A+)_Cloning ~ Insert / vector preparation. 열충격 단백질(DcHsp17.7) 유전자 재조합. 제한효소 처리 유무에 따른 pET11a와 plasmid의 전기영동 결과(사진有). CIAP처리 의의, pET11a에서 이용할 수 있는 Nde1, Nhe1, BamH1 제한효소가 인식하는 서열.

소개

"분자유전학실험레포트(A+)_Cloning ~ Insert / vector preparation. 열충격 단백질(DcHsp17.7) 유전자 재조합. 제한효소 처리 유무에 따른 pET11a와 plasmid의 전기영동 결과(사진有). CIAP처리 의의, pET11a에서 이용할 수 있는 Nde1, Nhe1, BamH1 제한효소가 인식하는 서열."에 대한 내용입니다.

목차

Ⅰ. Abstract

Ⅱ. Introduction
1. 클로닝 (Cloning)
2. 삽입유전자 : 열충격단백질 유전자 (Heat shock protein gene)
3. 벡터 플라스미드 (Vector plasmid)
4. 제한효소 (Restriction enzyme)

Ⅲ. Materials
1. Vector preparation
2. PCR product purification
3. 제한효소 처리 및 전기영동

Ⅳ. Methods
1. PCR product purification
2. Vector preparation
3. 제한효소 처리 및 전기영동

Ⅴ. Results

Ⅵ. Discussion

Ⅶ. References

본문내용

Ⅰ. Abstract
유전자 재조합은 특정 서열을 vector에 삽입하는 것으로, 재조합된 유전자를 복제하는 기술은 다양한 생물학 분야에서 사용되고 있다. 본 실험은 다음 실험에 사용될 insert DNA와 vector를 준비하는 것을 목적으로 하였다. insert DNA로는 열충격 단백질인 DcHsp17.7를 발현하는 유전자를, vector는 pET11a를 사용하였고 제한효소는 Nde1과 NHe1을 사용하였다. 제한효소 처리 전 vector는 10kbp이상에서 band가 나타났고 제한효소 처리 후의 vector는 6,000bp부근에서 band가 형성되었으며, insert DNA는 제한효소 처리 전과 후 모두 500bp 부근에서 나타났다. 또한 insert DNA의 결과 3조를 제외한 조에서는 uncut의 band가 double cut에 비해 근소하게 위쪽에 형성되어있다. vector의 결과에서 uncut의 band는 plasmid로 보이며, insert DNA의 경우 uncut과 double cut의 결과가 거의 비슷한 위치에서 band가 형성되어 있으므로 제한효소에 의해 잘린 부위의 서열이 매우 짧음을 알 수 있다.

<중 략>

Ⅵ. Discussion
Fig. 7은 프로토콜 상 샘플을 2ul 로딩 하였을 때는 band가 나타나지 않아 6ul로 로딩 양을 증가시켜 전기영동한 결과이다. pET11a를 제한효소를 처리하지 않은 것과 제한효소 처리한 경우를 비교해 보면 매우 흐릿하긴 하나 제한효소를 처리하지 않은 곳의 band가 처리 후의 band보다 더 높게 나타나는 것을 볼 수 있다. uncut band는 10,000bp 이상에서 나타나 genomic DNA로 생각될 수 도 있으나 동일 시료를 제한효소 처리한 후의 band가 uncut band가 나타난 위치에 형성되어 있지 않으므로 plasmid임을 알 수 있다. 또한 double cut의 결과 6,000bp부근에서 band가 형성되므로 제한효소에 의해 절단된 부위의 서열은 대락 4,000bp가 됨을 알 수 있다. band의 밝기가 매우 흐릿하므로 로딩한 샘플에 plasmid가 매우 적은 것으로 보인다.

참고자료

· Hanseul Park·Eunhye Ko·Eunsun Jang·Sujin Park·Joohee Lee·Yeh-Jin Ahn, 2013,
· Expression of DcHsp17.7, a small heat shock protein gene in carrot (Daucus carota L.), Horticulture, Environment, and Biotechnology, Volume 54, Issue 2, pp121-127