유전공학의 이해 3판 8장 정리 < 유전자와 유전체 분석 >

소개

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목차

8.1 유전자 분석
8.2 유전체 분석
8.3 유전체학 (Genomics)

본문내용

8.1 유전자 분석

1. 유전자 구조 분석
옛날 방법으로는 염기서열을 결정하기 전에 대략적인 구조를 파악하는 일부터 하였다.
획득된 유전자를 특정 제한효소로 처리하여 절편의 크기와 수를 조사한 후 제한효소 지도를 얻는것이 먼저였다. 또한 제한효소로 잘린 DNA 절편의 특성을 알아보는 서던블롯 분석을 수행하였다. DNA 절편에 특정한 DNA 서열이 존재하는지 여부를 판단할 수 있는 이 분석법은 제한효소 지도와 함께 효과적인 염기서열 결정을 위한 기초 자료로 사용되었다.

(1) 제한효소 지도 Restriction enzyme map
- 특정 DNA 절편 내 제한효소 자리를 나타낸 지도
- DNA 절편의 대략적인 특성을 알아보는데 유용
- 유전체에서 유전자와 돌연변이 위치를 알아보고자 할 때도 좋은 이정표 역할
- 유전자 진단 (돌연변이가 있는 개체의 유전자는 정상의 것과 제한효소 절편 길이가 다름)
- DNA 부분 절단(partial digestion)으로 제한효소의 농도와 처리 시간을 조절하면 DNA가 부분적으로 잘린 조각이 나타난다. 이후 전기영동을 통하여 크기표지자(size marker)로 조각의 크기를 조사해보면 특정 절편에 인접해 있는 절편이 무엇인지 추정할 수 있다.
(2) 서던블롯 분석법 (Southern blot analysis )
- 제한효소 등으로 잘린 DNA 절편에 특정한 DNA 서열이 존재하는지 여부를 알아보는 분석법
- 전기영동으로 분리된 DNA 절편을 나이트로셀룰로오스 또는 나일론 필터에 옮긴 후 특정 DNA 탐침과 혼성화시켜서 나타나는 밴드의 크기와 진한 정도를 분석하는 방법

과정
1. DNA 분리 및 제한효소 처리
2. 전기영동 젤 상에서의 분리
3. 블롯팅(blotting) (Southern transfer) – 젤을 염기성 용액에서 처리하여 DNA를 변성시켜 단일가닥으로 만든 다음 나이트로셀룰로오스 필터나 나일론 필터로 이동시킨다.
4. 혼성화 (hybridication) - 적절한 DNA 절편을 방사성 동위원소나 비방사성 표지를 포함하여 탐침(probe) 을 제조하고 이것을 이용하여 상보적인 결합을 하는 DNA

참고자료

· 없음