Plasmid DNA preparation예비레포트(Alkaline lysis miniprep,Boiling miniprep,Lithium miniprep)

소개

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목차

1. Subject
2. Introduction

본문내용

먼저 Alkaline lysis miniprep(Bimboim, Doly, 1979)은 가장 일반적으로 쓰이는 분리방법이다. Plasmid DNA는 plasmid을 지니고 있는 bacteria에서 적은 양의 배양으로 분리될 수 있는데, 1차적으로 Buffer S1(EDTA, RNase, glucose, Tris-Cl)의 주된 기능을 이용하여 세포벽을 파괴하고 RNA 분해를 촉진한다. glucose는 삼투압 유지, Tris-Cl은 pH 유지, EDTA는 킬레이트로서 세포벽에 있는 이온들을 제거하여 세포벽 파괴가 용이하도록 한다. 특히 Ca2+의 경우 세균 세포벽의 안정성을 유지하는데 중요하기 때문에 EDTA를 사용하면 세포벽 lysis가 쉽다. RNase는 RNA를 파괴해서 실험의 목표물인 plasmid DNA 채취가 쉽도록 한다. 이후 2차적으로 Buffer S2(SDS, NaOH)를 사용해 세포막 분해, DNA와 RNA 변성, 단백질 제거를 한다.

참고자료

· https://en.wikipedia.org/wiki/Plasmid_preparation
· https://garung88.wordpress.com/2011/08/03/dna-preparation-methods/
· Larry Snyder et al, 2017, 박테리아 분자 유전학, 와이북스, 4th edition, P175-180, P200-201