예비2_PCR A+ 예비레포트

목차

1. 실험 목적
2. 바탕 이론
3. 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적

PCR(Polymerase Chain Reaction)과 DNA에 대해 이해하고 PCR을 통해 중합효소를 이용하여 소량의 DNA를 증폭시키는 과정에 대해 이해하고 전기 영동을 통해 결과를 확인하고 고찰해본다.

2. 바탕 이론

(1) PCR(Polymerase Chain Reaction)

- PCR이란?

DNA 중합효소를 이용하여, 특정 유전자를 분석 혹은 유전자 조작이 가능한 수준으로 증폭하는 방법이다. 즉, 아주 미량의 DNA를 많은 양의 DNA로 합성하는 과정이다. 온도 cycling을 통하여 증폭 부위 양 말단에 해당하는 염기서열을 가진 primer 쌍(forwrad/reverse primer)이 증폭 대상 DNA에 결합하고 중합되고 다시 떨어지는 과정을 반복하면서 특정 부위의 DNA를 기하급수적으로 합성해내는 과정이다.

- PCR 필수 요소

PCR을 일으키기 위해서는 꼭 필요한 것들이 있다.
증폭 대상이 되는 DNA의 기본틀인 Template DNA, DNA 복제가 시작되는 지점을 제공하는 짧은 유전자 서열인 primer가 필요하다. 또한 유전자를 합성하는 재료로 이용되는 3개의 인산이 결합된 dNTP가 필요하다. 합성에 필요한 4가지 염기의 뉴클레오타이드를 모두 제공해야 하므로 dATP, dTTP, dGTP, dCTP를 필요로 한다. 마지막으로 DNA를 중합하는 과정에 필요한 효소 즉, DNA 중합효소인 DNA polymerase가 필요하다. DNA polymerase는 중합효소 연쇄 반응이 일어나는 과정에서 가열과 냉각이 반복되기 때문에 열에 변성이 일어나지 않아야한다.

(2) PCR 과정

PCR은 크게 DNA의 변성, 프라이머의 결합, DNA의 신장의 순으로 일어난다. 이 과정이 계속 반복하여 진행되면서(보통 20~40회) DNA의 원하는 부분을 증폭시키는 것이 PCR의 원리이다. 원하는 부분을 제대로 증폭시켰는지 확인하기 위해서 PCR산물의 크기를 비교할 수 있는 겔 전기영동을 이용하는 것이 일반적이다. PCR 산물의 크기는 DNA ladder라 불리는 것과의 비교를 통해 대략적으로 알 수 있다.

참고자료

· Reece 외 3명, 생명과학 개념과 현상의 이해 제 7판, Pearson, p 210~220
· 송민동 외 10명, 분자생물학 입문, 월드사이언스, 2018, p68~75
· PCR 실험의 원리와 응용, 세종출판사 p.6, p 39
· PCR primer design / (주) 다인바이오 연구소 p.1~5