Recombinant DNA technology(plasmid DNA, Recombinant DNA (재조합 DNA), miniprep, cloning, 전기영동 결과 분석)

소개

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목차

1. Title
2. Date
3. Purpose
4. Introduction
5. Material & Method
6. Result
7. Discussion

본문내용

1) Plasmid DNA
Plasmid DNA는 환상형의 이중가닥 DNA (Circular double-strained DNA)으로 세포내에서 염색체 DNA와는 별개로 존재한다. 자기 스스로 복제가 가능(Autonomous replication)하며, 대부분 세균(Bacteria)에 존재하나, 밀부 진핵세포 생물(예: Yeast)에도 존재한다. 1970년대 초에 유전공학의 도구로 사용되기 시작하여 Vector DNA, 플라스미드 DNA, 플라스미드 벡터, 운반체 DNA 등으로 불리며, 현재까지 분자생물학 기반 실험에서 강력한 클로닝 수단이자 단백질의 대량 생산자로서 기본적이고 중요한 실험 재료로 사용된다.

◦구조적 특징
• 복제 기점(Replication origin): DNA 복제의 시작점으로 숙주 범위(host range) 및 플라스미드 DNA의 copy(세포내 수)를 결정한다. (Single copy: 세포 하나당 1개의 플라스미드 DNA만 존재, Low copy: 세포 하나당 수십 copy, High copy: 세포 하나당 수백 copy)

• 항생제 저항성 유전자(Antibiotics marker): (암피실린 항생제-저항성 유전자(Ampr), 카나마이신 항생제-저항성 유전자(Kmr), 클로람페니콜 항생제-저항성 유전자)(Cmr))

• 다중 제한효소 클로닝 부위(MCS): Insert DNA를 절단 또는 삽입하기 쉽도록 여러 가지 제한 효소의 인식 서열을 플라스미드 DNA의 일정 부위에 인위적으로 모아 놓은 주위인 다중 제한효소 클로닝 부위(Multi cloning site)가 있다. 이 부위는 대부분 인위적으로 만든 plasmid DNA에 존재한다.

◦기능에 따른 분류
F Plasmid (Fertility plasmid)
Plasmid DNA의 전달에 관여하는 tra operon을 가지고 있으며, tra operon 유전자 산물들은 sex pili를 통해 접합에 의한 세균에서 다른 세균으로 플라스미드 DNA를 전달하는데 관여한다.

참고자료

· 캠벨 생명과학 10판/Campbell 외 6명/(주)바이오사이언스출판/2016/p.107~109,409~412
· https://blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=nanohelix&logNo=70179917885&parentCategoryNo=&categoryNo=35&viewDate=&isShowPopularPosts=true&from=search
· http://study.zum.com/book/14942
· 기초유전학실험교재/한규형/p.Miniprep of plasmid DNA