유전학 실험 결과 보고서

소개

Deletion mutant 제작 및 선별과 restrictiom enzyme 처리 및 정제에 관한 실험보고서입니다. 학점도 A+를 받았습니다.

목차

1. Deletion mutant 제작 및 선별
2. restrictiom enzyme 처리 및 정제

본문내용

1. Result
- PCR 후 전기영동결과
1,2조 모두 500-700bp 사이에 밴드를 형성했지만 1조의 밴드가 조금 더 위에 있고, 2조의 밴드의 경우에는 조금 더 아래쪽으로 내려간 것으로 보아 1조의 밴드가 약 600bp로 생각할 수 있고, 2조의 밴드가 그보다는 가벼워서 500-600bp 사이 인 것으로 추정된다. 3,4조의 경우에도 서로 비슷한 위치에 밴드가 있으나, 3조의 밴드가 살짝 더 아래쪽에 있는 것으로 보인다. ladder의 밴드가 약간 연하게 띠긴 하지만 그중에 진한 밴드위치로 구별하여 크기를 추정해보면 1000-1500bp 사이의 size이다. 전기영동에서 띠가 연하게 뜨는 이유는 농도가 낮았거나 전기영동 gel에 loading을 적게 했을 가능성 등이 있다.

2. Discussion
-flanking region
실험하고자 하는 DNA를 기준해서 바로 앞이나 바로 뒤의 DNA 조각을 flanking DNA라고 한다. 바로 앞의 DNA 조각을 up flanking region이라 하고, 뒤의 DNA 조각을 down flanking region이라 한다. 김경진(2009), 미생물유전학실험 15장 일반 재조합, p70-71, 지코사이언스
이번실험에서 flanking region이 균이 갖고 있는 부분이므로 따로 template를 안 쓰고 균주를 바로 따서 넣었다.

-homologous recombination
같은 극성을 가진 2개의 DNA 사슬을 nuclease로 절단하면 DNA 단편이 상동배열을 인식하여 DNA 사슬이 교차되는 Holliday junction이 형성되고, 그 후 섞인 DNA 사슬이 절단되어 최종적으로 연결되는 과정이다. Michael M. Cox(2014), 콕스 분자생물학 제 4판 13장 재조합 DNA 회복과 상동재조합, p682, 라이프사이언스
이번 실험에서는 항생제 마커를 flanking region들과 함께 상동 재조합시켰다.

참고자료

· 김경진(2009), 미생물유전학실험 15장 일반 재조합, p70-71, 지코사이언스
· Michael M. Cox(2014), 콕스 분자생물학 제 4판 13장 재조합 DNA 회복과 상동재조합, p682, 라이프사이언스 등등