형질전환실험 실험보고서

목차

Ⅰ. 목적

Ⅱ. 이론
1. E.coli (Escherichia coli)
2. Introduction
3. Transformation Method
4. Foreign DNA (GFP, RFP, YFP)
5. Competent Cell
6. Selection
7. 삽입 비활성화 (Insertional inactivation)

Ⅲ. 결과
1. Expression result
2. 원액 배양액
3. 1/0 희석 배양액

Ⅳ. 고찰

Ⅴ. 참고문헌

본문내용

Ⅰ. 목적
1. Competent cell을 제작하여 재조합 된 DNA를 숙주세포에 넣어보고, 형질전환이 잘 된 colony를 선별해본다.

Ⅱ. 이론
1. E.coli (Escherichia coli)
사람 및 동물의 대장에 서식하는 세균 중 하나로, 가장 먼저 발견된 장내 세균이다. 분변에 의해 오염된 환경에서는 쉽게 발견할 수 있기 때문에 식품, 음료, 식당과 같은 청결을 필요로 하는 대상의 오염의 지표로 사용되는 세균이다. 세포 분열 주기가 짧고 배양이 쉬워 가장 많이 연구된 대표적인 모델 원핵생물이다.
염색체는 원형의 단일 DNA분자로 되어 있다. 실험실에서 주로 사용하는 K-12유도체인 MG1655균의 유전체 염기서열이 1997년 처음으로 결정이 되었다. MG1655균의 지놈은 약 4,600,000 염기쌍으로 되어있고 총 4288개의 단백질을 암호화하는 유전자가 2584개의 오페론으로 구성이 되어 있으며, 7개의 rRNA 오페론과 86개의 tRNA 유전자를 갖고 있다. 1997년 이후로 1000종 이상의 대장균 분리종의 염기서열이 지금까지 보고되었다. 단일 종으로 분류가 되어 있음에도 불구하고 이들 분리종들의 지놈에 공통적으로 존재하는 유전자는 전체의 20% 밖에 되지 않는다. 질병을 유발하는 대장균은 지놈의 크기가 더 크며 감염을 일으키는데 필요한 유전자는 다른 종에서 기인한 것으로 생각되고 있다.
대장균은 통성혐기성이기 때문에 호흡을 위해 최종전자수용체로 산소를 가장 좋아하지만 산소가 없어도 질산염(NO3-)과 같은 다른 화합물을 전자수용체로 이용할 수도 있으며, 전자수용체가 없는 경우에는 발효만을 해서 살아갈 수도 있다. 화학유기영양체이기 때문에 광합성은 할 수 없고 유기물을 에너지 및 탄소원으로 반드시 필요로 한다. 매우 다양한 유기물을 이용할 수 있고 완전한 해당작용(glycolysis)과 크렙스회로(Krebs cycle)을 갖고 있을 뿐 아니라 대장에서 서식할 때는 Entner-Doudoroff 경로를 이용하여 포도당이나 대장점막에 존재하는 당류를 이용하기도 한다.

참고자료

· James D, Watson 외 5명, 양재섭 외 14명 역, 「왓슨 분자생물학 7판」, ㈜바이오사이언스, 2014, P62-63, 148-149
· T.A. Brown, 이병무 외 3명 역, 「유전자 클로닝과 DNA 분석 7판」, 월드사이언스, 2017, P
· https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5144995&cid=61232&categoryId=61232
· https://blog.naver.com/scentis_5/221247802400
· https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=435677&cid=60261&categoryId=60261
· https://ko.wikipedia.org/wiki/%EB%85%B9%EC%83%89_%ED%98%95%EA%B4%91_%EB%8B%A8%EB%B0%B1%EC%A7%88
· https://takara.co.kr/web01/product/productList.asp?lcode=9128
· D. Peter Snustad 외 1명, 이정주 외 6명 역, 「유전학원론 6판」, 월드사이언스, 2013, P172