Gene silencing2

목차

1. Introduction
1) 표현형의 확인
2) Bradford assay
3) PVDF (Polyvinyldene fluoride)
4) PAGE (Poly acrylamide gel electrophoresis)
5) SDS-PAGE

2. Material
1) 재료
2) 도구

3. Method
1) SDS-PAGE
2) Preparing a PA-gel
3) After transfer

4. Result

5. Discussion

본문내용

플라스미드와 같은 작은 DNA 조각이 제한효소로 절단되면 생성된 소수의 절편을 전기영동 젤 상에서 개별의 띠로 관찰할 수 있다. 이에 비해 한 세포의 유전체 DNA가 제한효소로 절단되면 여러 크기의 많은 절편이 생성된다. 4개의 염기서열을 인식하는 제한효소는 이론적으로 256염기쌍마다 한 번씩 절단할 것이다. 32억개의 염기쌍을 가지는 사람 유전체는 이 제한효소로 절단하였을 때 1200만개 이상의 절편을 생성할 것이다. 전기영동으로 분리한 다음 염색하면 수많은 다양한 크기의 절편이 존재하기 때문에 이 많은 절편들은 젤 상에 연속적인 흐름으로 나타날 것이다. 하지만 우리가 관심있는 것은 특정 유전자를 가지는 몇 개의 절편뿐이다. 이처럼 큰 DNA집단에서 원하는 절편을 찾는 하나의 접근 방법은, 원하는 유전자에 존재하는 염기서열에 상보적인 염기서열을 가지는 DNA 또는 RNA 분자인 탐침(Probe)을 이용하는 것이다. 이 탐침의 염기는 오직 상보적인 서열과 염기쌍을 형성할 것이며, 만일 적절히 표지된다면 이 탐침은 특정 유전자나 DNA서열의 위치를 찾아내는 데 사용될 수 있을 것이다. 탐침을 사용하기 위해서 먼저 DNA를 하나 또는 그 이상의 제한효소를 이용하여 절단하고 전기영동으로 이 절편들을 분리한다. 이런 다음 분리된 절편들을 단일가닥으로 변성시킨 후 나이트로셀룰로오스나 나일론 막과 같은 영구적인 고체 매질로 이동시킨다. 서던 블롯팅(Southern blotting)은 변성된 단일가닥의 절편을 젤에서 영구적인 고체 매질로 이동시키는 데 이용되는 한 방법이다. 단일가닥 DNA 절편이 이동된 다음, 막을 방사능이나 화학적으로 표지된 탐침을 포함하는 혼성화 용액에 넣는다. 탐침은 상보적 서열을 가지는 어떤 DNA 절편에 결합할 것이다. 그런 다음 결합하지 않은 탐침을 제거하기 위해서 막을 씻어내고 결합된 탐침은 방사선 자동 사진법이나 화학적으로 표지된 탐침에 적용되는 다른 방법에 의해 검출된다.

참고자료

· 전상학, 「유전학의 이해」, 2009, P504-505, 라이프사이언스
· 김영민, 「일반미생물학」, 2016, P337-341, 라이프사이언스