LiquidCulture&Expression

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
이번 실험에서는 LB배지에 eGFP DNA가 포함된 세포와 포함하지 않는 대조군을 배양시키고, 액체배지 2개에 ampicillin을 각각 넣고 eGFP를 넣은 것과 안 넣은 각 플라스크에 단백질의 발현의 유도물질(inducer)인 IPTG 용액을 첨가하여 다시 배양시킨다. 배양시킨 후 UV transilluminator를 통해 확인한 결과, 실험결과 대조군인 eGFP DNA가 포함되지 않은 control에서는 보라색 형광빛을 띄었고 실험의 결과물로는 녹색 형광색을 확인할 수 있었고 단백질이 발현된 것을 확인할 수 있었다.

2. Experiment
<실험 이론>
 enhanced Green Fluorescent Protein(eGFP)
기존의 Aequorea victoria에서 얻을 수 있는 GFP를 변형시켜 만든 물질이다. GFP란 녹색 형관 단백질로 생체 내에서 칼슘에 의해 활성된 발관단백질이나 세포복합체의 에너지를 운반하는 에너지 전달수용체로 작용하며, 특정 물질로부터 에너지를 받아 508nm의 녹생 형광을 방출하는 2차 형관 단밸질로서 작용한다. 세포에 이 GFP를 암호화하고 있는 DNA나 mRNA가 존재할 경우 이내 GFP 단백질이 세포내에서 합성되어 강한 형관을 발한다. eGFP는 UV파장, 파란색 계열의 파장대에서 녹생 형광빛을 띈다. 추적하고자 하는 단백질에 붙이고 세포에 주입하면 발관한다. 유전자 발현, 단백질 위치, 단백질과 단백질 사이의 상호작용을 관찰 할 수 있다.

<중 략>

4. Discussion
이번실험은 이전 실험에 비해 모든 조가 수월하게 정상적인 결과값을 얻을 수 있었다. IPTG induction처리가 제대로 되었기 때문에 결과값을 얻을 수 있었고, 대조군은 하지 않았기 때문에 보라빛을 띄는 것이다. 액체 배지를 통해 유전자가 조작된 균을 배양하고 IPTG 첨가하여 얻고자하는 특정 단백질의 발현을 관찰하는 실험이다.

참고자료

· 해양환경관리공단(KOEM)공식 blog “녹색 형광 단백질의 발견”
· 조문구, “배양공학”, 유한출판사, p78-152
· 김민주 외 5인, ”일반생물학실험“, 동아대학교 출판부, p120-142
· 이행석, ”알기쉬운 분자생물학“, 기전연구사
· Gray D. Christian 외 2인, 2015, ”Analysis Chemistry 7th“, WILEY, p474-477
· 김영재, ”기초에서 응용까지 최신미생물학“, p144-182
· 2019_생물화학공학이론및실험_실험노트