miniprep

소개

Plasmid DNA isolation from bacteria cell Miniprep

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
이번실험에는 Miniprep 중에서 Alkaline lysis방법을 이용하였다. 이는 pH변화에 따라 염색체 DNA의 부정확 재생능을 이용해 plasmid DNA를 분리해내는 방법을 지칭한다. 이번 실험에서 사용한 bacteria cell은 DH5이다. 실험중에 차례로 용액처리를해서 plasmid DNA를 분리해 내는 실험으로 총 5종류의 완충용액, buffer를 사용한다. 결과적으로 추출한 plasmid DNA를 전기영동 실험을 통해 이론적 DNA ladder와 전기영동 결과값을 비교하여 DNA크기를 비교했고 실험결과로 plasmid DNA의 크기는 이론적으로는 8kbp정도 나와야 하지만 전체적으로 약 4.0kbp가 나왔다.

2. Experiment
<기구 및 시약>
 S1 buffer (glucose + EDTA + RNase + Tris buffer)
Glucose는 삼투압을 유지하여 세포의 형태를 유지시켜주며 세포가 급격히 터질 때 DNA가 부서지지 않도록 보호해주는 역할을 한다. EDTA의 경우 킬레이트 물질로써 2가 양이온을 제거하여 세포벽을 불안정하게 한다. 특히 Ca이온의 경우 세균 세포벽의 안정성을 유지하는데 중요하기 때문에 EDTA를 사용하면 세포벽 lysis가 쉬워진다. RNase(리보뉴클라아제)는 RNA를 파괴하여 plasmid DNA의 채취를 용이하게 해준다.

<중 략>

4. Discussion
Miniprep의 실험방법 중에서 Alkaline lysis방법을 이용한 이번 실험에서 pH변화에 따라 염색체 DNA의 부정확 재생능을 이용해 plasmid DNA를 분리해내는 방법을 잘 사용했다고 생각합니다. 여러번의 용액처리를 통해 미생물의 세포벽과 세포막을 부수고 유전자 재조합에 필요한 Plasmid DNA를 얻어내고 전기영동실험을 통해 분리가 되었는지 확인해보는 실험이었는데 전기영동결과 모든 조가 4kb의 결과값을 얻어냈음을 알 수 있었다.

참고자료

· J. Sambrook, Molecular cloning a laboratory manual
· 오계현 외 3명, 2011, 생명과학7판, 신광문화사
· Jane B. Reece 외 5인, 2012, 캠벨 생명과학 9판, (주)바이오사이언스, p396~412
· 남상욱, 권현빈, 2008, 유전공학의 이해, 라이프 사이언스
· 김명원 외 9명, 생명과학 개념과 현상의 이해, PEARSON , p186,210~212
· 김민주 외 5명, 일반 생물학실험, 동아대학교 출판부, p135~154