PCR

소개글

"PCR"에 대한 내용입니다.

목차

1. 제목 ---------------------------------p.1
2. 목적 ---------------------------------p.1
3. 배경지식 ----------------------------p.1
4. 가설 설정----------------------------p.2
5. 실험재료 및 방법-------------------p.3
6. 결과 ---------------------------------p.5
7. 고찰 ---------------------------------p.6
8. 참고문헌-----------------------------p.7

본문내용

1. 제목: PCR

2. 실험 목적: 타켓 유전자의 발현 확인을 위한 유전자 증폭방법인 PCR 방법에 대해 학습한다.

3. 배경 지식

• 세포파괴: 세포 파괴는 앞에서 한 플라스미드 실험을 통해 이미 한번 학습한 바 있다. 세포 파괴시 이용하는 용액은 알칼리성(음이온), SDS, 비누성분이며 pH가 높고 계면 활성제이다.

• PCR: 원하는 DNA 절편을 증폭할 때 사용하는 기술이다.

① 준비물: 주형 DNA, 프라이머, dNTPs, DNA 합성 효소(Taq)

프라이머: RNA 프라이머가 아닌 DNA 프라이머이며 프라이머를 붙인 사이의 DNA 절편을 증폭하여 얻는다.

DNA 합성 효소: 일반적인 효소들은 열에 약하여 변성되기 쉬워 PCR 기술에 적합하지 않다. 따라서 DNA 합성 효소는 온천에서 사는 고온에서 안정한 효소를 사용한다.

② PCR 과정

ⅰ) DNA 변성: 이중가닥의 DNA을 단일가닥으로 만드는 단계이며 94도씨에서 일어난다.

ⅱ) DNA 시말체 혼성화: DNA 프라이머가 주형가닥에 결합하는 단계이며 가장 중요한 단계이며 약 60도에서 일어난다.

ⅲ) DNA 중합: 새로운 DNA 가닥이 증폭되는 과정이며 5‘에서 3’ 방향으로 증폭하며 72도씨에서 일어난다.

4. 가설 설정: 실험 결과 target DNA가 복제 될 것이다.

5. 실험 재료 및 방법

• 실험 재료: ① Template DNA (pEGFP-N1 vector)-5ng/ul
② Primer for EGFP (product size: 720bp)
③ Taq DNA polymerase (5U/ul), reaction buffer (10X)
④ dNTP(10mM), MgCl2 (20mM), DW
⑤ Thermocycler, PCR tube, pipette

• 실험 방법: ① PCR 튜브를 꺼낸다.
② 튜브에 23.75 ul를 넣는다.
③ 10X reaction buffer 5 ul를 넣는다.
④ 10 mM dNTP 5 ul를 넣는다.
⑤ 20 mM MgCl2 3.75 ul를 넣는다.
⑥ Primer (Forward, Reverse) 가각 5 ul 씩 넣는다.

참고 자료

https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=296421&cid=60262&categoryId=60262