[생화학 실험] 네오쿠프로인 실험(효소의 반응속도, D-글루코오스)

목차

1. 네오쿠로인 실험
2. 효소의 반응속도 조사
3. D-글루코오스 조사
4.탈인산가수분해 효소

본문내용

◎토의

▷이번 실험은 당의 환원력에 기초한 네오쿠프로인 시험을 실시하여
D-glucose의 농도를 측정하는 것이다.
즉 당의 산화가 이루어지는 동안 Cu++ 이 Cu+로 환원 되는 것을 이용
하는 네오쿠프로인 시험으로 D-glucose의 표준검량곡선을 만드는 것이 다.

▷위의 DATA에 있는대로 D-glucose의 양을 2배로 늘리면 A460(흡광도)도 마찬가지로 2배로 높아져야 하는데 이번 실험에서는 흡광도의 값이 두 배가 되지 않았다. 그 이유로는 우선 각각의 시험관에 용액들을 채울 때
알칼리 구리용액(A용액)과 네오쿠프로인 용액(B용액) 은 glucose와 물을
먼저 넣고 1㎖를 맞춘 다음 차례로 넣어야 하는데 시험관의 개수가 6개 이고 조원들이 분담해서 넣다 보니 약간의 오차가 발생한 것 같다.

▷또한 혼합된 용액을 100℃의 물에서 약 15분간 가열을 해주어야 하는데
항온조의 온도가 100℃에 못 미치는 온도였기 때문에 과정에서 주어진
15분 보다 조금 더 오래 담가 둔 것도 오차의 원인일 것으로 추정된다.
네오쿠프로인 용액은 60분이 지나면 불안정해 지기 때문이다.

▷가열 후 급랭을 시킬 때에도 정확히 어느 정도의 차가운 물에서 냉각을
시켜야 하는지 수돗물의 온도가 적당했는지 여부도 문제가 될 수 있다고
본다.

▷가장 중요한 A460에서 1.0 미만이 되도록 희석을 시키는 과정에서 약
5배정도의 물을 넣어야 했는데 피펫으로 넣기에는 너무 번거롭고 시간이
많이 걸릴 것 같아 10㎖메스 실린더를 사용하여 시험관에 물을 첨가
시켰다. 나름대로 정확히 첨가했으나 6개의 시험관의 용액의 높이가
약간씩 차이가 생겼다. 역시 처음 결과에서 2번 시험관에 흡광도가 높게 나와 다시 보정한 결과 흡광도는 glucose양이 많을수록 증가 되는 데이 터로 나왔다.

▷그러나 glucose의 양과의 관계는 일치하지 않아서 표준 곡선의 기울기
및 Y절편 값은 위의 사소한 오차들 때문에 이상적인 값을 얻지 못한 것
같다.

▷참고로 탄수화물을 정량하는 방법은 여러 가지가 있다. 단순히 몇가지 만 을 이론으로 배우고 있지만 탄수화물을 단당류, 또는 환원당 등의 종류에 따라 여러 가지 실험방법이 있다.
탄수화물을 정량할 수 있는 또 다른 방법에는 Fehling반응, Benedict반 응 등이 있다.
Fehling반응에 있어서 CuSO4는 알칼리와 반응하여 Cu(OH)2로 되고 이것 이 환원성을 가진 당류에 의해 환원되어 적갈색의 Cu2O로 변한다.
Benedict반응은 Fehling반응과 같이 환원당에 의해서 Cu2O의 적색침전이 생성되는 것은 같으며, 다만 Benedict시약은 Fehling용액에 비하여 알갈 리성이 훨씬 약하므로 더 안정한 것이 특징이다.

참고자료

· 없음