PCR(Polymerase chain reaction, 중합효소연쇄반응) 실험레포트

소개

PCR(Polymerase chain reaction, 중합효소연쇄반응) 실험레포트입니다.

목차

Ⅰ. Purpose(목적)

Ⅱ. Introduction(소개)
1. PCR(Polymerase Chain Reaction, 중합효소 연쇄 반응)이란?
2. PCR mixture의 조성
3. PCR의 원리
4. PCR에 사용되는 DNA polymerase의 종류

Ⅲ. Materials & Methods(실험재료 및 방법)
1. Material
2. Method

Ⅳ. Result(결과)

Ⅴ. Discussion(고찰)

VI. Figures

VII. References(참고문헌)

본문내용

Ⅰ Purpose
본 실험에서는 주어진 sample인 2254 mouse와 2255 mouse의 genotyping을 하기 위한 Master mix를 제조하였다. genotyping하고자 하는 mouse는 Prox1 발현조직에 형광표지단백질인 GFP(Green Fluorescent Protein)를 발현하는 transgenic mouse와 wild type mouse를 교배하여 얻은 자손이다. GFP target primer를 이용하여 PCR을 진행하면 Prox1 gene에 GFP를 암호화한 서열을 연결해준 transgenic mouse의 경우, 전기영동을 한 결과를 대략 280bp의 PCR band를 관찰할 수 있다. Wild type의 경우, GFP가 없기 때문에 band를 관찰할 수 없으며 이 결과를 토대로 genotyping을 할 수 있다.

Ⅱ Introduction
1. PCR(Polymerase Chain Reaction, 중합효소 연쇄 반응)이란?
DNA 또는 RNA의 특정영역을 선택적으로 복제하여 증폭시키는 분자생물학적 기술이다. 반응에 필요한 시간이 2시간 정도로 짧으며, 실험 과정이 단순하고, 전자동 기계로 증폭할 수 있기 때문에 분자생물학, 의료, 범죄 수사, 생물의 분류 등 DNA를 취급하는 작업 전반에서 중요한 역할을 담당하고 있다.

2. PCR mixture의 조성
• DNA(from mouse tail)
genotyping 하고자 하는 mouse의 꼬리를 3mm 자른 후 여러 용액을 넣어주어 lysis(세포를 용해시키는 것)하여 genomic DNA 추출한다.
• 10X buffer
PCR buffer는 사용하는 DNA polymerase의 활성을 위한 최적의 조건을 만들어주는 buffer를 말한다. PCR buffer는 주로 Tris-HCl, KCl, 그리고 MgCl2를 포함한다.

참고자료

· https://ko.wikipedia.org/wiki/%EC%A4%91%ED%95%A9%ED%9A%A8%EC%86%8C
· _%EC%97%B0%EC%87%84_%EB%B0%98%EC%9D%91
· http://compbio.korea.ac.kr/wiki/images/8/82/TakarPCRprotocol.pdf
· PCR 주의사항 https://m.blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=nanohelix&logNo=70178929690&proxyRe
· ferer=http%3A%2F%2F– PCR 주의사항
· forward and reverse primer
· https://cafe.naver.com/elpisbio/79
· master mix를 만들 때 ice에서 하는 이유
· https://www.researchgate.net/post/why_doing_PCR_master_mix_on_Ice
· Pfu polymerase와 Pfx polymerase의 차이
· http://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=475426&ksr=1&FindText=pfx