[유전학 실험보고서] DNA Extraction, PCR & DNA purification, plasmid extraction, Real-Time PCR

소개

1) DNA Extraction
2) PCR & DNA purification
3) plasmid extraction
4) Real-Time PCR
에 대한 실험 보고서 입니다.

목차

Ⅰ. 서론
1) DNA Extraction
2) PCR & DNA purification
3) plasmid extraction
4) Real-Time PCR

Ⅱ. 실험 재료 및 과정
1) DNA Extraction
2) PCR & DNA purification
3) Real-Time PCR 1차
4) plasmid extraction
5) Real-Time PCR 2차

Ⅲ. 결론 및 고찰
1) DNA Extraction
2) PCR & DNA purification
3) Real-Time PCR 1차
4) plasmid extraction
5) Real-Time PCR 2차

Ⅳ. 참조

본문내용

세포는 크게 세포벽과 세포막 그리고dna의 세개의 부분으로 나뉜다. 세포벽은 세포의 구조를 유지시키고 외부환경으로부터의 보호 역할을 한다. 세포막은 세포와 세포 외부의 경계를 짓는 막으로 세포 내의 물질들을 보호하고 세포간 물질 이동을 조절한다. 우리는 이번 실험에서는 이렇게 세포 제일 안쪽에 있는DNA를 추출할것이다.
DNA는 유전체(genomic) DNA 라고 한다. 즉 그 생명체가 살아가는데 필요한 모든 유전정보를 담고 있는 DNA이다.화학적 DNA추출은 세포용해(lysis), 단백질과RNA의 제거, DNA 추출, 분리된 DNA의 양과 순도 측정 등 4개의 단계로 진행된다. 먼저 세포로부터 DNA를 분리하기 위해서는 DNA가 세포 밖으로 유출될 수 있도록 세포벽 및 세포막을 분해시켜야 하며, 이어서 세포막을 파괴할 때 유리되는 DNA를 분리하여야 하고, 단백질이나 RNA의 혼입을 최소로 줄이면서 DNA를 분리해야 한다. 세포벽이 있는 박테리아의 경우 라이소자임(lysozyme) 효소를 처리하여 세포벽을 분해시키고 Sodium Dodecyl S μlfate(SDS)를 처리하여 세포막을 분해한다. 이렇게 되면 DNA가 세포 밖으로 유출된다. 세포 밖으로 유출된 DNA 분획은 Phenol, isoamyl alcohol 등을이용하여 불순물을 제거한 후, 에탄올을 이용하여 침전시켜서 분리할 수 있다. 효소를 포함하는 세포 내 단백질들은 proteinaseK에 의해 분해되고 분해된 단 백질들은 phenol과 chloroform을 처리함으로써 제거된다.
다른방법으로, 실리카 등을 이용한 고체로 된 층에 정전기적 인력에 의해 DNA가 결합하는 원리를 이용하여 분리할 수 있다. 적정한 농도의 염(Na+)과 높은 pH 를 갖는 버퍼에 DNA를 넣고 컬럼을 통과 시키면 실리카로 구성된 막에 DNA가 결합하게 된다. 결합된 DNA는 물 또는 TE 버퍼를 이용해서 녹일 수 있다.

참고자료

· 유전학의 이해와 기법 (고려 의학,2011)
· 알기쉽고 재미있는 분자생물학 4판(라이프 사이언스)
· 진단분자생물학 실습(청구문화사, 한국임상병리학과 분자생물학 교수회)
· brock의 미생물학 제 14판(바이오사이언스출판)
· Campbell 생명과학 8판(바이오사이언스)
· 정ㅇㅇ 교수님 ppt 자료