[실험헤포트]연세대학교 분자생물학 (Animal Cell Culture, Cell lysis, and Protein Quantification) 실험 보고서

소개

"[실험헤포트]연세대학교 분자생물학 (Animal Cell Culture, Cell lysis, and Protein Quantification) 실험 보고서"에 대한 내용입니다.

목차

1.Introduction(background)
2.Material
3.Method
4.Result
5.Discussion
6.Quiz

본문내용

1.Introduction(background)
우리는 Lab1에서는 실험기본장치들, Lab2에서는 세포배양, 그리고 Lab 3, 4, 5에서는 gene과 관련한 실험을 진행했다. Lab 4에서는 특정 gene을 E.coli에 translation시켜, target gene을 복제 하였다. 우리는 이 gene을 2가지 방법으로 활용할 수 있음을 배웠다. 첫번째로는, gene 자체로만 활용하는 것이다. 그것이 바로, Lab 5에서 진행한 plasmid DNA Isolation이다. 두번째로는, gene에 의해 발현된 protein을 활용하는 것이다. 본 레포트에서는 이와 연관된 protein isolation을 다룬다. 그리고, 추가적으로 standard curve를 이용하여 protein의 농도를 측정하는 방법도 배울 것이다.
A.RIPA buffer: 빠르고 효과적인 cell lysis(세포의 용해)를 위해 쓰이며, 배양된 mammalian cell로부터 나온 protein의 solubilization(용해도가 증가하는 현상)을 가능하게 해준다. 이 때, protein의 생물학적 작용을 억제시키는 역할도 한다.
B.Bradford assay: sample안에 있는 전체적인 protein의 농도를 측정하고자 할 때 쓰이는 방법이다. 산성 조건에서 protein 분자는 Coomassie dye에 붙는데, 이 때 dye의 색이 갈색에서 푸른색으로 변한다. 그리고, 갈색과 푸른색의 차이가 최대가 되는 595nm에서의 흡광도를 측정하고, standard curve와 비교하여 농도를 구한다.
C.SDS: electrophoresis를 할 때, 주로 Molecular weight, Charge, Shape 3가지가 이동속도에 영향을 미친다. Protein의 경우 너무 많은 shape를 가지기 때문에, 그냥 electrophoresis를 시키면 서로 구분하려면 많은 어려움이 따른다.

참고자료

· Yonsei University. Basic Molecular Biotechnology Laboratory Book.
· SIGMA-ALDRICH. RIPA Buffer
· Bio-101. Ph.D. Fanglian He(University of Pennsylvania, USA). Bradford Protein Assay.
· BiteSizeBio. Dr.Nick Oswald. How SDS-PAGE Works.
· SCIENCING. John Brennan. Components of Lysis Buffers.
· Cold Spring Harbor Protocol. Yonsei University Library. RIPA buffer
· ThermoFisher SCIENTIFIC. PMSF Protease inhibitor.
· Mary Johnson. Detergents:Triton X-100, Tween-20, and Mpre
· BIO-RAD. Quick Start Bradford Protein Assay Instruction Manual