Smad1 RT PCR

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론
3. 실험 방법
4. 실험 결과
5. 고찰
6. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
TGF- 의 superfamily 중 하나인 smad-1에 대해 숙지한다. 이 SMAD-1을 RT-PCR을 이용하여 증폭하여, HEC1-a와 stroma에 대한 결과를 분석하고 그 상호작용에 대해 조사한다.

2. 실험 이론
1) PCR (polymerase chain reaction)
유전자의 구조와 기능을 연구하기 위해서는 많은 양의 DNA가 필요하다. 미생물을 사용하여 원하는 유전자를 복제함으로써 많은 양을 얻을 수도 있지만, 세포배양을 하지 않고 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)에 의해서도 많은 양의 유전자를 얻을 수 있다. PCR은 유전체라는 커다란 건초더미 속에서 유전자라는 바늘을 찾아내는 기술인 셈이다. 수많은 다른 유전자들 속에서 하나의 유전자가 표적이 되어 기하급수적으로 증폭됨으로써 분석 가능한 양만큼의 DNA를 얻는다. 현재 이러한 PCR 기술은 유전공학의 핵심 기술로 자리하고 있다.

PCR은 DNA의 양쪽 가닥을 주형(template)으로 하여 동시에 primer extension을 일으킴으로써 primer annealing site 사이의 특정 염기열을 증폭하는 방법으로, Cetus사의 Mullis에 의하여 개발되었다. 초기에는 polymerase로써 Klenow fragment를 이용하였으나 이 효소는 열에 약하기 때문에 매 cycle마다 새로 첨가해야 하는 문제점이 있었다. 그러나 Thermus aquaticus (Taq)와 같이 고온에서 번식하는 세균의 DNA polymerase를 이용하게 되면서 반응의 specificity 및 효율이 크게 향상되어, PCR은 현대 분자생물학 연구에서 가장 중요한 기술의 하나로 자리매김하게 되었다. PCR에는 4가지의 deoxyribonucleotide, 2가지의 primer, polymerase, template DNA, 그리고 Mg2+이 들어 있는 reaction buffer가 필요하다.

참고자료

· 동물의 발생과정에서 antagonisits에 의한 BMP 신호전달의 조절, 유권, 한국생명공학 연구원 발생분화연구실
· TGF-B singnaling by smad protein, 김보완 외 7명, 혈관세포연구회, 대한당뇨병학회
· TGF-B군의 신호에 의한 신경세포 생성조절, 김준, The University of California, 2009
· 구강 편평 상피 암종에서 TGF-β1과 MMP-2의 발현과 경부 임파절 전이 간의 상관관계에 관한 연구, 김좌영 외 2명, 대학구강악안면외과학회지 제33권 제3호, 대한구강악안면외과학회지, 2007, pp. 199-203
· Phospho‐Smad1 modulation by nedd4 e3 ligase in BMP/TGF‐β signaling, Byung Gyu kim 외 4명, Journal of bone and mineral research vol. 26 no.7, pp.1411-1424
· Transcription Factor 7-Like 2 (TCF7L2) Regulates Activin Receptor-Like Kinase 1 (ALK1)/Smad1 Pathway for Development of Diabetic Nephropathy, Araoka Toshikazu 외 8명, Molecules and cells, p. 209-218, 2010