[분자생물학실험]Transformation

소개

실험을 통하여 transformation의 과정을 이해하고,IPTG, x-gal의 사용하여 transformation의 유무를 판단해보는 실험레포트입니다.

목차

1. 실험 목적

2. 실험 이론 및 원리
1) Transformation(형질전환)
2) Transformants(형질전환체)의 selection 방법
3) 오페론 (0peron)

3. 실험 기구 및 시약
1) 실험 기구
2) 실험 시약

4. 실험 방법
1) 실험 과정

5. 실험 결과
1) 결과 분석

6. 토의 사항
1) 실험 고찰

본문내용

1. 실험 목적
가. 실험을 통하여 transformation의 과정을 이해하고, x-gal의 사용하여 transformation의 유무를 판단한다
나. 재조합된 DNA를 competent cell에 삽입하여 형질전환 후, ampicillin과 x-gal이 들어 있는 LB plate에서 배양하여 colony를 형성시킨 후, 색깔로 재조합 DNA를 판별한다.
다. 형질전환 기술을 익힌다.
라. Lac Operon의 Mechanism을 이해한다.
1) 형질전환은 외부 DNA를 받아들여 한 생물체의 형질이 변환된 것을 의미한다. ampicillin항생제에 저항성을 가지는 플라스미드가 세포 내에 삽입되면 그 세균도 저항성을 갖게 된다.
2) LacZ의 MCS 에 외부 DNA가 삽입된 플라스미드가 도입된 박테리아의 colony는 Operon이 작용하지 않아 β-galactosidase가 활성화되지 않아 X-gal이 그대로 남게 되어 blue가 아닌 white colony를 형성한다.

<중 략>

나. 오페론 (0peron)
유전자 발현의 조절 단위 (operation unit). 오페론은 대부분의 경우 원핵생물에만 존재한다. 여러 유전자를 오페론으로 묶어 한꺼번에 발현을 조절하면 유전자들의 발현이 쉽게 조절될 수 있다.
1) 오페론의 구조 : 조절부위 + 구조부위 (전사되는 유전자 부위)

<중 략>

4. 실험 방법
가. 실험 과정
1) T-blunt 반응액 3～6㎕를 competent cell 100㎕에 조심히 넣는다. (pipetting하면 안됨)
2) 얼음에서 10～30min 반응시킨다.
3) 42℃에서 30초간 heat shock을 주고 바로 얼음에 담가 2분간 안정화한다.
4) LB 배지(Amp+) 900㎕를 첨가한다.
5) tube 뚜껑을 닫고 37℃에서 1시간 200rpm으로 흔들어주며 배양한다.
6) 200～500㎕를 취해서 Amp+ LB 고체배지에서 밤새 배양한다.(IPTG, X-gal처리)
7) colony 선별 후 plasmid DNA를 prep한다.

참고자료

· 없음