생화학실험자료 효소활성(β-galactosidase assay)

목차

1. 실험목표
2. 실험원리
3. 시약 및 기구
4. 실험방법

본문내용

1. 실험목표
- 유전자 발현 검사 및 형질 전환 시에 많이 사용되는 LacZ를 이해하고 발현을 확인 하는 방법을 배운다.
- β-galactosidase assay를 통해 β-galactosidase의 활성도를 측정해 본다.

2. 실험원리
1. 효소 (enzyme)
생화학반응에 있어 에너지 장벽에 요구되는 활성 에너지의 양을 낮추어줌으로써 반응이 빨리 일어나게 하는 촉매작용을 하는 단백질로, 한 개 또는 그 이상의 기질을 사용하여 새로운 산물을 만드는 물질이다.
1) 효소의 특이성 (specificity)
효소는 대부분 기질과 공유 결합이 아니라 수소 결합이나 이온 결합 등에 의해 약한 결합을 하고 있다. 이러한 약한 결합이 많은 부분에서 일어나므로 매우 강한 결합을 보이게 되는데 이는 기질이 마치 자물쇠에 있는 열쇠와 같이 많은 부위에서 효소와 결 합하며 정확이 맞아야 함을 의미한다. 이와 같이 효소와 기질의 배열이 상보적인 것을 효소의 특이성이라 한다. 일반적으로 하나의 효소는 하나의 화학 반응만을 촉매하고, 이때 매우 상보적인 결합을 하는 기질을 사용한다.
기질과 상보적인 결합을 하는 것을 기질특이성, 하나의 효소가 하나의 반응을 촉매하는 것을 반응특이성이라 한다.
예를들어 기질 a,b,c가 있을 때 효소X가 기질a하고만 결합할 수 있는 것을 기질특이성,
기질a가 화학반응을 통해 x,y,z 세 가지 product가 될 수 있을 때, 이중 product x 로 향하는 반응만을 촉매하는 것을 반응특이성이라 한다.

2) Enzyme assay
Enzyme assay는 크게 4가지 방법으로 나눌 수 있다.
(1) Direct Assay
효소가 기질을 product로 만드는 과정이 있다고 할 때, 생성되는 product의 양의 변화를 측정하는 방법이다. 측정하는 방법으로는 product가 흡수하는 파장의 흡광도 를 측정하는 방법이 있다.

참고자료

· 없음