SDS-PAGE, Western blot analysis

목차

Ⅰ. Materials

Ⅱ. Methods

Ⅲ. Result
1. 패턴 분석
SDS-PAGE
Western blot
2. SDS-PAGE만 하지 않고 western blot까지 하는 이유는?

Ⅳ. Discussion
1. 바이러스 단백질
2. Discontinuous system (불연속 버퍼 시스템)
3. 단백질과 SDS의 상관관계
4. 항체와 항원의 특성 및 반응 원리
5. 기타 단백질 면역 반응 실험의 종류

Ⅴ. Reference

본문내용

Ⅰ. Materials
- 12% gel (running gel)
40% Acrylamide 2.25ml, 1.5M Tris-Cl (pH 8.8) 1.9ml, 10% SDS 0.075ml, 10% APS
0.075ml, TEMED 0.005ml, S.D.W 3.2ml/ 7.5ml

- 5% gel (separating gel, stacking gel)
40% Acrylamide 0.313ml, 1M Tris-Cl (pH 6.8) 0.315ml, 10% SDS 0.025ml, 50% APS
0.025ml, TEMED 0.005ml, S.D.W 1.822ml/ 2.5ml

Ⅱ. Methods
PAGE gel 만드는 방법
1. 두꺼운 유리판과 얇은 유리판을 D.W.로 얼룩 없이 깨끗이 씻는다.
→ Acrylamide는 H₂O에 분해
2. 70% ethanol로 닦아서 물기와 먼지를 제거한다.
3. Running buffer를 comb를 꽂았을 때 2mm 정도의 공간이 생기는 위치까지 넣는다.
4. 70% ethanol을 running buffer 위에 넣어서 gel의 기포가 빠지고 gel이 평평해지도록
한다.
5. Gel이 굳으면 70% ethanol을 버리고 물로 헹군 후 3M paper로 여분의 물기를 모두
제거한다.
6. Stacking gel은 기포가 생기지 않도록 벽면에 조심히 넣고 빠르게 comb에 끼운다.

(SDS-PAGE)

1. SDS-PAGE tank에 gel판을 잘 고정시켜 채워준 후 1X running buffer를 채워준다.
-> gel이 완전히 굳지 않으면 well이 지저분하거나 휘는 경우가 있다.
2. 내부의 buffer 밖으로 새지는 않는지 확인한 후, comb를 뺀 후 주사기를 이용해 well을 간단하게 청소해준다.
3. 전압기를 켠 후, 110V, 400mA에서 1시간 20분정도 loading 한다.

* 이후, PAGE gel을 commassie blue에 staining, destainging 하여 바로 관찰하는 것이 SDS-PAGE, transfer 과정으로 넘어가면 western blot analysis임.

참고자료

· 남상욱 외 2인, 유전공학의 이해 제 2판, 라이프사이언스, p190
· 정용석 외 3인, 분자 바이러스학 제 3판, 월드 사이언스, p26~37
· 최준호, 하영미, 바이러스학, 라이프사이언스, p129
· http://m.blog.daum.net/_blog/_m/articleView.do?blogid=07ekt&articleno=8647750
· http://m.blog.naver.com/no9v2/40177952894
· file:///C:/Users/jooyon/Downloads/9781588298270-c1.pdf
· https://en.wikipedia.org/wiki/Capsid
· http://science.dongascience.com/supplementviews/group-view?acIdx=2752&acCode=15&page=19) https://www.reference.com/science/two-functions-virus-protein-coat-e9e46b5cba398c3e#
· https://www.quora.com/What-is-the-protein-coat-of-a-virus-called
· http://www.dynebio.co.kr/yc/bbs/board.php?bo_table=data1&wr_id=14&page=2