생명과학실험 레포트3 bradfod assay

목차

Ⅰ. 실험 일시
Ⅱ. 실험 목표
Ⅲ. 실험 목적
Ⅳ. 실험원리
Ⅴ. 실험 재료
Ⅵ. 실험 방법
Ⅶ. 실험 결과
Ⅷ. Discussion
Ⅸ. 참고문헌

본문내용

Ⅰ. 실험 일시
2013 / 3 / 29 (금) 3:30pm ~ 5:00pm

Ⅱ. 실험 목표
Column chromatography 를 이용하여 분리해 낸 단백질들을 Bradford Method 를 통해 정량한다.
다음 주 SDS – PAGE 실험을 위한 sample 들을 절차에 맞게 준비한다.

Ⅲ. 실험 목적
첫째, Bradford Assay 의 원리를 이해하고 sample 내에 존재하는 단백질의 양을 Bradford Method 를 이용하여 정량 할 수 있다..
둘째, 정량을 위한 Standard 용액을 만들 수 있으며 이를 이용하여 Standard Curve 를 작성할 수 있다.

Ⅳ. 실험원리
● Bradford Assay 원리
용액의 단백질 농도 정량법은 생화학 연구에서 자주 사용되는 중요한 기술이다. 정량법으로 여러 가지 방법들이 개발되었으나 민감도가 각각의 측정법마다 다르고 반응에 사용하는 시약들이 특정한 아미노산과만 반응하기 때문에 한가지로 모든 단백질의 농도를 정량하기는 힘들다. Bradford Assay 는 UV Spectrophotometer 를 이용, 흡광도를 측정하여 standard 물질인 BSA 를 기준으로 자신의 시료에 단백질이 얼마만큼 들어있는지 측정하는 방법 중 하나이다. 이 방법은 신속하고 간편하게 단백질을 정량할 수 있어 널리 쓰인다. Dye 로는 Bromophenol Blue 를 사용하며, 이 dye 가 단백질과 결합해 생기는 파장의 변화를 측정한다. 단백질의 정량을 위해서는 standard 가 필요한데, BSA 를 이용해 standard curve 를 얻을 수 있다. 여러 농도의 BSA (반드시 0농도를 포함) 를 만들어 dye 를 넣은 후 반응 시켜 595nm 에서 흡광도 측정을 하고 그 결과 값을 이용해 standard curve 를 그린다. 이 때 curve 는 직선형에 가까울수록 신뢰도가 높아진다. 그런 다음 정량하고자 하는 단백질이 든 sample 을 dye 처리해 흡광도를 측정해 BSA 의 값과 비교해보면, BSA 는 이미 농도를 알고 있으므로 sample 의 흡광도 결과를 이용해 sample 의 농도를 계산할 수 있게 된다.

참고자료

· 생물학 실험서, 라이프 사이언스, 민철기, 강창수
· 단백질실험노트 (하), 월드사이언스, 김승호, 장규태
· 실험생화학, 탐구당, 한국생화학회 교재편찬위원회