[생명과학실험] Alexa 594(Tuj1)의 neural tube(신경관)에서의 발현

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 토의 사항
7. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
1.1. 항원-항체반응을 통해 내가 원하는 단백질이 어느 세포에서 나오는지, 어느 정도 얼마큼 나오는지 알아 볼 수 있다.
1.2. antigen-antibody reaction을 이용하여 Alexa 594(Tuj1)이 neural tube(신경관)의 어느 곳에서 발현하는지 알아보자.

2. 실험 이론 및 원리
2.1. Immunohistochemistry(면역조직화학)
조직의 세포에서 protein과 같은 antigen의 발현 양상을 antigen-antibody reaction을 이용하여 검출하는 방법이다. 특정 antigen이 발현되는 세포에 특이적으로 결합하는 primary antibody을 넣어 서로 결합시킨다. 이때 이 complex을 Secondary antibody 등을 처리하여 반응을 증폭시키고 screening 한 후 현미경으로 관찰하면 세포에서 단백질 발현을 판단할 수 있다. 이 방법은 암세포와 같은 비 정상 세포를 판별하는데 주로 쓰이는 방법이다.
2.1.1. 면역조직화학법의 원리
면역조직화학적 검사를 이용하여 검출하는 항원은 분자량이 5,000정도인 단백, 다당류, 핵산 등의 고분자 물질이다. 항원에는 항체를 식별하는 특정한 부위가 있는데, 이를 항원 결정부위 (epitope) 라고 부르며 분자량 5,000에 대하여 한군데가 있는 것으로 알려져 있다. 즉, 분자량 이 20,000이면 4개 정도의 항원 결정부위가 있다.

항원에 결합하는 항체는 혈청내의 면역글로블린 (Immunoglobulin, Ig) 이라 부르는 단백질에 존재한다. 면역조직화학에 이용되는 일차항체는 IgG 분자이며 항원과의 결합부위를 갖는 Fab(antigen binding fragment)라 불리는 짧은사슬과 Fc (crystallizable fragment) 라고 불리는 긴 사슬로 구성되어 있다. 일차항체(Primary Antibody)는 일반적으로 단일클론항체 (Monoclonal Antibody) 와 다 클론항체 (Polyclonal Antibody) 로 구분된다.

참고자료

· 진단조직화학의 이해 개정판, 양용석 외 3명, 정문각, 2008
· 면역조직화학의 이해, 김경태 저, 대학서림, 2005