[생명과학실험]SDS PAGE gel 제조 & Gel Loading & Coomassie Brilliant Blue Staining

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 토의 사항
7. 참고 문헌

본문내용

Buffer의 선택은 gel의 resolution에 영향을 준다. Buffer는 반응을 하지 말아야 하고, 대부분의 protein과도 반응을 하거나 protein을 변화시켜도 안된다. 이때 Tris-HCl buffer는 이러한 성질을 가장 잘 갖추고 있는 buffer이다. 또한 Tris-HCl buffer는 pH값을 원하는 값으로 안정 시켜 준다. 그 다음으로 알아 볼 buffer는 acrylamide이다. 이 buffer는 물에서 vinyl addition polymerization이라는 반응을 일으킨다. Acrylamide는 물에 녹았을 때, 천천히 그리고 지속적으로 auto-polymerization이 일어나면서 긴 단일 가닥의 polymer를 형성하기 위해 분자들과 결합한다. 이때 free radical 발생 시스템이 있으면 polymerization은 더욱 더 잘 일어난다.

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1.1. Gel making
1.1.1. Spacer plate와 short plate을 에탄올이나 DW로 먼지를 제거해 준다.
1.1.2. Spacer plate와 short plate를 꼭 맞게 겹친 후 short plate가 내 쪽으로 오게 casting frame에 고정시킨다.이때 두 plate의 밑면이 평평하게 잘 맞춰 졌는지 주의한다.
1.1.3. 가스켓이 plate를 충분히 밀착시켜주어 세지 않는지를 확인하기 위해 DW를 부어본다.
1.1.4. Plate가 떨어지지 않도록 손으로 잘 잡고 뒤집어 DW를 흘려보낸다.

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위 사진은 sample들을 SDS-PAGE gel에 loading했을 때 결과물이다. Gel loading이 기본적으로 2hr이상 걸리는 작업이기 때문에 미리 준비한 결과물을 받아 보았다. 이때 gel을 plate에서 떼어 내게 되면 위아래가 구분이 가지 않기 때문에 gel의 왼쪽 상단 부분을 보면 gel을 아주 약간 잘라내어 윗 부분을 표시한 것을 볼 수 있다.

참고자료

· Chemistry, Steven S. Zumdahl, Brooks, 2009.01.17., p.80-81, p.701
· Transmission-electron microscopic observations of freeze-etched polyacrylamide gels. J Chromatogr, Rüchel R, Steere RL, Erbe EF, 1978, p.563–575