PCR 실험 보고서

최초 등록일
2016.04.26
최종 저작일
2015.04
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목차

(1)실험제목

(2)실험 재료

(3)실험 목표

(4)실험 방법
(가)해부
(나)RNA 추출
(다)RNA 농도측정
(라)cDNA 합성
(마)PCR
(바)전기 영동
(사)Gel Purification
(아)Ligation
(자)Transformation
(차)Pick up
(카)집균
(타)효소 처리

(5)실험 결과

(6)고찰

본문내용

1.실험제목
PCR을 통한 Gene cloning

2.실험 재료
실험어 : 금붕어(Gold Fish)
실험 도구 : 원심분리기, 전기영동기, 마이크로 피펫, PCR기계, vortex,
실험 시약 : DEPC,RNA,oligo dT, PCR buffer,dNTP,trisol,ampicillin 등

실험어 : 금붕어

붕어와 형태가 비슷한 점, 염색체의 수가 같고 또 같은 형인 점, 그리고 순계분리하여 사육을 반복해 가다 보면 붕어가 생긴다 하여 붕어의 변종으로 되어 있다.

원산지는 양쯔강 하류의 저장성 항저우이다.
처음에는 왕후귀족의 관상물로 사육이 시작되었으며, 송대에는 상품화되어 서민사회에 보급되어 갔다.
16세기 초 일본으로, 16세기 말 영국으로, 18세기 중엽 프랑스로, 19세기 초 미국 등으로 전래되어 세계적으로 전래되었으며 많은 신품종이 생겨났다.


3.실험목표
모든 고급 테크닉의 시발 점되는 실험인 Gene cloning으로 DNA를 자르고 붙이고 변형시켜서 실험에 필요한 재조합 DNA (recombinant DNA)를 재조하고, Southern, Northen, cell culture 실험 등에서 사용해야할 생체 내 유전자를 얻을 수 있을 뿐만 아니라 기본적인 효소의 처리와 DNA의 분리 및 조작방법을 배운다.

4.실험방법
실험 방법은 크게 4가지로 나누어 진다.
1.유전자를 설정하고 그 유전자를 얻어낸다.
2.얻은 유전자를 vector에 삽입한다.
3.유전자가 삽입된 recombinant DNA를 박테리아 세포 내로 주입한다.
4.박테리아 중에서 올바르게 만들어진 clone을 확인하고 선택한다.

(가)해부
A.금붕어를 준비하고 MS-222(마취제)를 사용하여 마취한다.
-해부 시에 금붕어가 스트레스를 받게 되면, 호르몬의 변화가 있을 수 있어 이를 방지하기 위함이다.
B.마취된 금붕어는 얼음 위에 올려둔다.
-꼬리 쪽에 평평한 각도로 주사바늘을 밀어 넣고, 척추밑까지 들어가게 한다음, 피를 약 200㎕뽑아낸다.
C.해부 가위를 이용해 원하는 부위를 Sampling한다.

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