[분자세포생물학] Electrophoresis of DNA (전기영동)

목차

1. Introduction
2. Materials
3. Methods
4. Result
5. Discussion

본문내용

․ Electrophoresis of DNA
Electrophoresis of DNA는 알고자 하는 DNA bend를 gel에 넣고 전기를 흘려주어 확인하는 방법이다. 원심분리 방법은 비용이 비싸고, 분리의 시간이 오래걸리며 또한 10,000Da이하의 작은 분자는 침전시킬수 없다. 이를 보완한 방법이 전기영동법(electropheresis)이다. 이 방법은 원심력 대신 전기장을 이용하는 방법으로 단순한 기기와 저렴함, 그리고 단백질로부터 뉴클레오티드 한 분자까지 정확하고 신속하게 분리할 수 있는 장점이 있다. DNA의 두 사슬은 당과 인산이 번갈아 연결되어 만들어진다. DNA의 인산은 하나의 음전하를 띄고 있으며 수천개의 염기가 연결된 DNA절편은 그만큼의 음전하를 띈다.

<중 략>

Ⅱ. Material
담배 genomic DNA, 0.8% Agarose gel, loading buffer(30% glycerol, 0.25% bromo-
phenol blue), 0.5 X TBE buffer
(5 X TBE buffer: Tris base 24.2g Glacial acetic acid 5.7ml 0.5M EDTA(pH8.0)
20.0ml(total 1L), EtBr)
Electrophoiesis Kit, UV transilluminator

Ⅲ. Method
1. 0.8% agarose gel (0.8g agarose, 100ml 0.5X TBE buffer)을 만든다.
2. 굳은 agarose gel을 Electrophoresis Kit에 넣고 0.5 X TBE buffer로 채운다.
3. g DNA 2ul + loading buffer 1ul
- gel의 홈속에 넣는다.
4. λ DNA를 marker로 같이 loading
5. 100V에서 15min running
6. 15분 경과 후 Etbr 용액에 담그고 15분 처리
7. UV tranasilluminator에서 확인하고 사진을 찍는다.
8. λ DNA와 비교하여 상대적인 g DNA 와 plasmid DNA의 농도를 확인하고 각각의
DNA의 양상을 비교한다.

참고자료

· 이영렬, 최신분자생물학입문, 한빛지적소유권, 1999,
· 정병준, 분자세포생물학, 아카데미서적, 2001,
· Bruce Alverts, 필수세포생물학, 탐구당, 1999,
· 정병균, 진단 분자생물학, 현문사, 2002,
· 박상대, 분자세포생물학, 아카데미서적, 2001, pp14-15
· J.D Watson, 유전자의 분자생물학, 탐구당, 1991, pp269-279, 343
· 심웅섭, 분자생물학, 월드사이언스, 1999, pp386-387
· 장호남, 생물화학공학, 방한출판사, 1997, pp54-58
· L.G Jchere, 기초 생화학, 월드사이언스, 1999, p312