[분자유전학] Gel Extration (DNA 추출)

목차

I. Introduction
II. Material
III. Method
IV. Result
V. Discussion

본문내용

I. Introduction
Elution은 전기영동을 통해 분리해낸 DNA를 추출해내는 과정이다. agarose gel로부터 이런 DNA의 Elution과정이 가능한데, DNA를 전기영동 하여 관찰되는 band중에서 특정한 band를 gel로부터 유리해 낼 수 있다. 이 방법은 재조합 DNA를 만들 때 중요하게 쓰이는 기술으로 보다 회수율이 높고 elution된 DNA의 순도가 높으면, 그 과정에서 빠르고 간단한 방법으로 실행 할 수 있는 방법이 계속적으로 개발되고 있다. gel에서 DNA를 회수하는 많은 방법 중에는 대표적으로 전기영동에 의한 DEAE-cellulose membrane위로 DNA 조각을 이동시키는 방법, 투석 주머니 속에서의 전기추출, Low melting agarose gel로부터 DNA용리, Gene clean kit을 이용한 추출, QIA quick kit(QIAGEN)을 이용한 추출 방법 등이 있다.

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Methods
Agarose gel로부터 DNA fragment를 깨끗하고 얇게 잘라낸다.
Gel slice를 tube에 넣고 무게를 잰다. Gel 1 volume당 Buffer QG 3 volume을 첨가한다. (gel의 최대 양은 400mg)
10분 동안 50℃에서 보관(또는 gel slice가 완전히 녹을 때까지). 매 2~3분 동안 tube를 vortex한다.
Sample에 isopropanol 1 volume을 더해서 섞는다.
제공된 2ml collection tube에 QIAquick spin column을 놓는다. DNA를 결합하기 위해, QIAquick column에 sample을 옮기고 1분 동안 원심분리를 한다. 통과된 것을 버리고 같은 tube에 다시 column을 놓는다.
Wash를 위해, Buffer PE를 column에 750μl를 더한다. 원심분리를 1분 동안 한다. 통과된 것은 버리고 다시 같은 tube에 column을 놓는다.
남아있는 wash buffer를 제거하기 위해 1분 동안 제공된 2ml collection tube에 column을 원심분리를 한다.
깨끗한 1.5ml microcentrifuge tube 안에 column을 놓는다.
DNA를 elute하기 위해, column membrane 중앙에 물 또는 Buffer EB(10mM, TrisCl, pH8.5) 50 μl를 더하고 1분 동안 원심분리를 한다.
만약 정제된 DNA를 gel에서 분석하기 위한다면, 정제된 DNA 5 volume에 Loading Dye 1 volume을 넣는다. Gel에 loading하기 전에 위아래로 pipetting을 해서 solution을 섞는다.

참고자료

· T.A Brown, 유전자 클로닝 입문, 탐구당, 2004,
· Trudy Mckee, 최신생화학, 교보문고, 2009,