분자생물학 실습 레포트, living cell (생세포) 에서 DNA purification (정제, 추출)

소개

분자생물학 실습 중 제출한 실험전 레포트입니다.
생세포에서의 DNA 추출 및 정제에 대한 내용이며 절차마다 매우 상세하게 이유와 바탕 지식으로 설명되어 있습니다. 좋은 성적 받았으며 많은 배경지식들이 들어가 있기 때문에 다른 비슷한 과목에서도 참고용으로 사용될 수 있습니다.

목차

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본문내용

Chapter 3 Purification of DNA from Living Cells
3가지 다른 DNA 종류 준비하기. 첫번째는 Total cell DNA. 클론 해야 할 유전자 확보 위해서. Genomic DNA 들어가있고 plasmid 같은 부가적 DNA 있음. 두번째는 plasmid DNA. 처음과 정제법 같지만 마지막 염색체 DNA와 plasmid DNA 나누는 단계 있음. 세번째는 cloning 벡터 사용해야할때 필요한 phage DNA. Phage capsid 없애는 기술 필요함. M13은 예외, 박테리아 플라즈미드 같이 정제됨.
3.1 Total cell DNA 준비-박테리아 배양한다. 세포들을 파괴시켜 내용물이 나오게 한다. 이 세포 추출물들을 처리해서 DNA 빼고 다 없앤다. 남은 DNA 용액을 농축시킨다.
3.1.1 박테리아 배양 증가 및 수확 -액체 배지에서 대부분의 박테리아를 키운다. 배지는 박테리아가 효율적으로 자라날 수 있는 영양소와 농도를 맞춰줘야 한다. M9는 합성배지이다. 내용물을 다 알고 있다. 이 배지는 질소, 마그네시움, 칼슘 같은 무기질과 탄소와 에너지 공급을 위한 포도당 등을 포함하고 있다. 실제적으론 미량 원소와 비타민도 M9에 첨가된다. 정확히 어떤 첨가물이 들어가는지는 박테리아 종에 따라 다르다. Luria Bertani (LB)는 다르다. 복합적 또는 불확정한 배지이다. 구성요소가 어떤 것들이고 얼마나 들어갔는지 모른다. 이것들은 모르는 화학 합성체로 이루어진 혼합물이기 때문이다. LB는 다른 부가 첨가물 필요 없음. 합성배지는 통제된 상태에서 박테리아가 자라야 할 때 필요함. 하지만 DNA 때문에 키우는거면 복합배지가 더 낫다. 원심 분리기 사용해서 배지에 있는 박테리아 분리. 박테리아 시험관 밑 부분에 쌓인다. 윗부분에 있는 배지액은 따라낸다.
3.1.2. 세포 추출물 준비-세포 추출물 얻기 위해서 세포막, 벽 같은 것들을 다 붕괴시켜야 한다. 하는 방법 두 가지. 물리적, 화학적 방법. DNA 준비하기 위해선 화학적 방법 자주 사용됨.

참고자료

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