Competent cell (수용세포 만들기), Heat shock를 이용한 transformation, Spreading on LB agar, LB broth에 분화

소개

미생물학 실습 중 적었던 레포트 중 하나입니다.
제목에 적혀있는 대로의 내용이 (Competent cell (수용세포 만들기), Heat shock를 이용한 transformation, Spreading on LB agar, LB broth에 분화) 실험 사진, 절차, 토의 등과 함께 있습니다.

목차

1. Competent cell (수용세포 만들기)
2. Heat shock를 이용한 transformation
3. Spreading on LB agar
4. LB broth에 분화

본문내용

Principle
이 실험은 transformation을 위해 Escherichia coli 가 다른 DNA를 잘 받아들일 수 있는 상태인 competent cell을 만드는 실험이다. 일반적 환경에선 대부분의 박테리아가 외부 DNA를 잘 받아들이지 않기 때문에 물리적, 화학적 처리를 해준다. 즉, 숙주세포가 외부 DNA (여기선 plasmid DNA)를 받아들일 수 있는 상태의 세포를 만들기 위함이다. 대장균의 세포막 및 세포벽에는 세포막과 세포벽을 연결하는 channel들이 있는데 이곳을 통해서 DNA 분자들이 세포 안으로 들어간다. 수용세포를 만드는 시험의 많은 단계가 차가운 상태에서 진행 되는데, 이는 영하에 가까운 (또는 영하의) 상태에서는 세포막이 얼어 있기 때문에 세포막의 여러 구조들이 (특히나 pores들이) 안정화 되어 있을 수 있기 때문이다.

Apparatus
피펫
얼음
37도 shaking incubator
Table top centrifuge
시험관
e-tube

Reagents
LB broth: competent cell이 될 E. coli 를 우선 배양해주기 위해서. LB (Luria-Bertani) 배지는 undefined medium이다. 즉, 정확히 무엇이 얼마나 들었는지 모른다는 것이다. 이는 trypton과 효모 추출물 때문에 그런데, 질소, 당분, 무기질, 유기질 등의 여러 영양소를 공급한다. 덕분에 다른 추가물을 넣을 필요가 없다. 박테리아가 완벽히 통제된 상황에서 자라야 한다면 M9같은 defined media (배지의 구성요소와 양을 다 앎)을 쓰겠지만 이 실험에선 DNA source나 DNA를 받아들일 숙주로 쓰이기 때문에 LB broth 같은 complex, undefined medium이 더 알맞다.
Ice cold MgCl2-CaCl¬2 (80mM MgCl2, 20mM CaCl¬2): 차가운 상태의 MgCl2-CaCl¬2는 세포벽이 플라즈미드 DNA에게 침투되게 해주는 역할을 한다. 정확히는 MgCl2가 고농도이기 때문에 강한 삼투압이 발생하여 세포막과 벽을 흐물흐물하게 해준다. (세포벽을 permeable하게 만들어 준다)

참고자료

· 없음