현대생물학실험1-재조합 단백질

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Results
5. Discussion

본문내용

Abstract

이번에 하게 된 실험에서는 단백질 형성을 위해 media와 Buffer와 제조하고, 이들을 사용하여 대장균(E. coli)에서 목표로 하는 재조합 단백질을 발현시킨 후 정제하여 그를 확인하는 것이었다. 실험은 Buffer와 Media 제조를 포함하여서 총 4번에 걸쳐서 진행되었다 처음으로 하게 된 실험에서는 뒤의 3단계에서 쓰일 Buffer A, LB(Lysogency Broth), Lysis buffer(Taq DNA polymerase의 정제를 위한)를 제조하였다. 각 media와 buffer에 쓰일 구성요소들을 정확하게 측정, 계산한 뒤에 잘 혼합하였다. 두 번째로 한 실험에서는 Taq DNA polymerase를 주입한 E. coli기 exponential phase(지수기) 일때 IPTG를 넣어주어 발현시켰다. 원심분리를 한 뒤에 pellet만 남겨서 보관하였다. 그 다음으로 하게 된 실험에서는 과발현시킨 Taq를 정제하였다. 세포를 파괴한 뒤에 원심분리기에 넣어 상층액을 얻고 곱게 빻은 ammonium sulfate 7.5g를 약 1시간 반에 걸쳐서 거품이 생기지 않도록 넣어주었다. 또한, 혼합이 잘 되도록 stiring bar를 이용하였다. 이 과정은 salting out(염석) 방법을 사용하여 Taq를 침전시키는 방향으로 행해졌다. 침전시킨 후에 원심분리를 하여 상층액은 폐기하고 남은 성분으로 dialysis를 하였다. 끝으로 한 실험에서는 이전의 실험과정을 통해서 얻어진 Taq를 확인하는 과정으로 중합효소 연쇄반응(PCR, Polymerase chain reaction)을 했다. Taq는 PCR에 필수적인 물질로서, Taq가 제대로 얻어지지 않는다면 PCR이 제대로 시행되지 않았을 것이다. 실험 결과 사용한 vibrio의 DNA size인 300kb 정도에서 bond를 볼 수 있었다.

참고자료

· Cooper Hausman. 2014. The cell 6th edition. SINAUER. pp8-12
· 강동훈, 실험 생화학, 탐구당, pp 62~66
· 김정국, 이광호, 강종백. 유전자 클로닝 입문 3rd edition 월드 사이언스. pp30~34
· 이건형. 2010 일반미생물학 제 6판 2권, 교보문고. pp218-225, pp233-236