시료준비와 단백질정량 & 전기 영동과 gel staining, western blot

목차

1. 실험목적
2. 실험결과
3. 고찰

본문내용

1. 실험목적
1) 시료준비와 단백질정량
1. 완충용액의 특성을 이해하고, 세포의 파쇄방법을 익힌다.
2. 단백질 정량 방법과 원리를 이해하고, bradford법을 이용하여 단백질농도를 계산하고 전기영동용 시료를 준비한다.
2) 전기영동과 gel staining &Western blot
1. 단백질 전기영동의 원리를 이해한다.
2. 세포나 조직 내의 특정 단백질의 발현 양을 알아보는 면역 발색법 (western blot 또는 immunoblot) 에 대하여 알아본다.

<중 략>

(5) 실험을 통하여 얻은 결과를 설명하시오.
첫 번째, BSA 표준단백질을 분광광도계로 흡광도를 측정한 결과값을 보면 1μg에선 0.161의 평균값을 2 μg에선 0.322값을 나타내며, 5 μg에선 0.496값을 나타냄을 볼 수 있다. 즉, 표준단백질의 양이 많은 튜브에선 흡광도 값도 크게 나왔다는 것을 확인할 수 있는데 이 값을 통해서 BSA 표준 단백질의 흡광도-단백질 농도 그래프를 그려보면y = 44.396x2 - 14.837x + 1.2525의 추세선을 얻을 수 있다. 이 그래프는 흡광도값이 증가할수록 단백질의 농도도 증가함을 나타내는데(농도이므로 양이 증가한다고 봐도 무관하다), 이는 다시 말하면 단백질 함량이 많을수록 흡광도의 값도 높아진다는 사실을 나타낸다는 것을 알 수 있다. 즉, 흡광도와 단백질 농도는 서로 비례관계에 있다고 볼 수 있다.
두 번째로, 시료인 MB와 MT의 흡광도 측정 결과 값을 살펴보면 MB의 흡광도 평균값은 0.365이고, MT의 흡광도 평균값은 0.391인데, 이 측정값을 가지고 표준단백질의 흡광도-단백질농도 그래프(y = 44.396x2 - 14.837x + 1.2525)에 대입하면 두 시료의 농도를 구할 수 있다. MB의 1/2농도값은 0.875826μg/μl이고, MT의 1/2농도값은 0.947535μg/μl로 큰 차이는 없지만 MB보다 MT의 단백질농도가 더 높음을 알 수 있다.

참고자료

· 분자생물학 유전혁명의 의해,GEORGE M.MALACINSKI 저, 월드사이언스
· 유전자 클로닝과 DNA 분석,T.A Brown 저, 월드사이언스
· 진단 분자생물학, 정병균 역, 현문사
· 생화학 7판, Lubert Stryer, 범문에듀케이션
· 개정 단백질실험노트 하, 김승호 외 역, 월드사이언스
· 단백질 실험 핸드북, 강호일 역, 월드사이언스
· 전기영동 최신 프로토콜, 강호일 역, 월드사이언스
· 단백질실험노트 하, 김승호 외 공역, 월드사이언스
· Lehninger's 생화학 상, 이동기, 유한문화사,
· Lehninger's 생화학 3판 하, 김선희 외 공역, 서울외국서적,
· 면역생물학 5판, Charles.A.J 저, 김태규 외 공역, 라이프사이언스,
· http://blog.naver.com/hyouncho2?Redirect=Log&logNo=60145551716