SDS-PAGE를 이용한 단백질의 분석

소개

SDS-PAGE를 이용해서 Alkaline Phosphatase의 밴드를 찾는 실험을 한후 제출한 만점 레포트 입니다.

목차

1. 주제

2. 실험목표

3. Observations and Results :
1. SDS-PAGE의 원리를 잘 이해하였는가?
2. 실험에 사용된 단백질의 분자량은 이미 알려져 있다. 표준분자량밴드 중 어느것이 우리가 정제하고자 의도했던 밴드인지 논하라.
3. 이상적으로 gel band들은 서로 잘 분리되어 가느다랗게 보여야 한다. 염색된 gel band들이 뚜렷하고 잘 분리되어 보이는가? 만약 그렇지 않다면 무엇이 문제일 수 있는지 논하라.

4. Discussion

Reference

본문내용

주제 : SDS-PAGE를 이용한 단백질의 분석
실험목표 : 단백질 시료를 전기영동을 통해 분리해낸 후, Coomassie staining을 한다.

Observations and Results :
1. SDS-PAGE의 원리를 잘 이해하였는가?

일단 SDS에 대해서 먼저 이해해야한다. SDS는 Sodium Dodecyl Sulfate의 약어로 음이온화 계면활성제의 일종이다. 단백질과 가장 강력한 결합력을 보이기 때문에 실험실에서 일반적으로 SDS는 protein의 전기영동을 위한 준비물로 사용된다. SDS는 protein의 polypeptide backbone을 파고들어 비공유결합을 방해한다.

<중 략>

위의 사진은 우리 조에서 coomassie brilliant blue로 staining을 하고 destaining까지 마친상태의 젤이다. 왼쪽에서 차례대로 blank, marker(Intron #24052 Gangnam marker), PM, FT, 30-1, 30-2, 100-1, 100-2, 150-1, 150-2, 200-1, 200-2, marker, marker이다. Marker를 넣은 이유는 크기의 기준을 위해서다. 우리가 정제하고자 했던 단백질의 이름은 Alkaline Phosphatase이다. 이 단백질의 분자량은 140-160kDa정도 된다. 하지만 AP는 Homo-dimer이기 때문에 disulfate 된 것을 생각해서 80-90kDa의 분자량을 찾아야 할 것이다.

<중 략>

오늘 실험하면서 우리조에서 잘못한 점이 여러가지 있었다. 첫번째로는 젤이 destaining이 제대로 안됐다. 이건 다른조도 마찬가지인 것 같지만. 시간이 더 필요했었을까 여전히 background가 파랬다. 조금더 투명해졌더라면 밴드들이 더 잘보여서 결과분석에 수월 했을 수 있을것같다. 두번째는 전기영동하기전 젤에 Marker, PM, FT를 로딩했을때 적정량보다 훨씬 많이 넣어버렸다. 그래서 다른조 보다 Marker가 굉장히 진하게 나왔다.

참고자료

· http://www.natural-health-information-centre.com/sodium-lauryl-sulfate.html
· http://fa.kfda.go.kr/standard/egongjeon_standard_view.jsp?lang=kor&SerialNo=619&GoCa=1
· http://www.jtbaker.com/msds/englishhtml/s3670.htm
· http://dasan.sejong.ac.kr/~yjlee/p-agarose%20gel.htm
· http://eshop.intronbio.com/product/View.asp?pIdx=262&pageno=1&MainItem=C&SubItem=E