[일반생물학실험]세포 사멸 관찰

소개

세포의 죽음을 초래하는 두 가지 기전의(Apoptosis, Necrosis) 차이점을 비교해 보는 실험레포트입니다.
실험과정은 다음과 같습니다.
1. Cell seeding과 세포사멸 유도
2. Wright-Giemsa 염색
3. DNA fragmentation(laddering) 확인

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 토의 사항
7. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
세포의 죽음을 초래하는 두 가지 기전의 차이점을 비교한다.
세포 사멸에 따르는 세포막의 변화를 관찰한다.
세포 사멸에 따르는 핵의 변화를 관찰한다.

2. 실험 이론 및 원리
프로그램 된 세포 사멸(programmed cell death, apoptosis)
세포 수와 조직의 크기를 조절하며 생체의 발생 및 항상성 유지에 필요한 과정으로 세포 분열 만큼 중요하며 활발한 분자적 작용기적이 수반된다.
핵 내에 존재하는 크로마틴이 응축되어 핵막에 늘어선 뒤 핵의 붕괴와 더불어 세포 표면이 돌출되어 세포막에 둘러싸여 떨어져 나와 세포 사멸체(apoptotic body)를 형성한다. 이러한 apoptotic body는 대식세포에 의해 제거된다.

세포 괴사(necrosis)
세포가 유해성 물질에 의해 영향을 받거나 세포 내 환경 변화에 의해 나타나는 현상이다.
핵 내 chromatin 이 덩어리로 응집되나 핵의 붕괴는 없고 세포 내 소기관이 팽창되고 시 간이 지나면 세포막의 파괴로 세포가 융해된다.

세포 사멸 기전의 형태학적 특징 비교
세포의 죽음을 초래하는 원인 및 진행 과정에 차이가 있는 두 가지 세포 사멸 기전에서 뚜 렷한 형태학적 특징을 관찰할 수 있다.

Wright-Giemsa 염색의 원리
혈액도말표본의 간이 염색법의 한 방법으로서 혈액을 도말, 건조, 고정한 후 염색액에 2∼6분간 반응하고 수세, 건조하여 검경함. 염색 중 염색액의 증발을 막기 위하여 페트리디쉬속에 넣어 실시한다.
∴ 실험 과정
methanol과 acetic acid를 3:1로 혼합한 용액 300㎕를 넣고 5분 동안 방치한다.
99% methanol 용액에 2분 동안 고정시킨다.
wright-giemsa 염색약에 15분 염색한다.
10% wright-gimesa 완충용액(wright-giemsa solution 25㎖ + phosphate buffer 225㎖)에 5분 동안 염색한다.
PBS용액으로 세척한다.
50% 글리세롤로 처리한 뒤, 현미경 하에서 관찰한다

참고자료

· Apoptosis: Methods and Protocols, Second Edition (Methods in Molecular Biology), 2009