서울대학교 [생물학실험] Plasmid DNA 추출 및 제한효소 반응과 전기영동

소개

서울대학교 일반생물학실험에서 A+를 받은 레포트입니다.
정확한 정보를 바탕으로 인트로 부분을 쓰고
심화된 지식으로 결과를 심층 분석해서 실험 논의 부분이 탄탄합니다.

목차

1. 실험제목
2. 실험 목적
3. 실험 재료
4. 실험 방법
5. 실험결과 및 논의

본문내용

1. 실험제목 : Plasmid DNA 추출 및 제한효소 반응과 전기영동
2. 실험 목적
*먼저 수행하는 실험은 Plasmid DNA를 가지고 있는 대장균(E.coli)로부터 Plasmid DNA를 추출해내는 실험이다. 이 실험에서는 다양한 buffer(Resuspension buffer, Lysis buffer, Neutralization buffer, Washing buffer, Elution buffer)를 이용하여서 대장균으로부터 높은 순도의 Plasmid DNA를 추출해내는 것을 목적으로 한다. 다음으로 수행한 실험은 제한효소를 이용하여 추출해낸 Plasmid DNA의 특정부위를 절단시켜 DNA bands를 만들어낸 후 Agarose gel electrophoresis(전기영동을 시켜주는 기계)를 이용하여 DNA bands들을 전기영동 시켜 그 모습과 특징을 확인하는 것을 목적으로 한다.
*Alkaline lysis은 Bacteria cell을 파괴하는 과정이다. Bacteria cell들은 RNase A용액의 존재 하에 NaOH와 SDS에 의해 lysis 되는데 여기서 RNase A는 RNA를 분해하는 역할, SDS는 cell membrane의 phospholipid와 protein component들을 용해시키는 역할, NaOH는 cell이 깨지며 나오는 chromosomal DNA와 protein들을 모두 변성시키는 역할을 한다. Neutralization & plasmid DNA adsorption to the DNA-spin column membrane에서는 lysate를 고염도와 acidic한 환경으로 노출시켜 neutralized가 되도록 한다.

<중략>

5. 실험결과 및 논의

* 우선 처음에 수행한 Plasmid DNA 추출실험에서 각 buffer가 하는 기능
* 이 실험에서 쓰인 PstI와 EcoRI은 2형 제한효소이다.
* EtBr에 대한 설명
* 전기영동을 시켜주는 데 있어 주의사항
* 결과에 대한 다양한 고찰 및 가능성

참고자료

· Campbell, 2009, Biology, Eighth Edition, Pearson, P.359, 423
· 이상인, 2010, 생물2 교과서, (주)지학사, P.284~285